Anticuerpo Policlonal de Conejo anti-EED para WB, IF, IP, ELISA - O75530

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de EED

• La proteína Polycomb EED (Proteína de desarrollo del ectodermo embrionario), también designada como HEED, COGIS y WAIT-1, es un componente central del complejo represivo Polycomb 2 (PRC2). El splicing alternativo y la iniciación alternativa dan lugar a múltiples isoformas.
• Como parte del complejo PRC2/EED-EZH2, EED metila la histona H3 en la lisina-9 y la lisina-27, lo que conduce al silenciamiento transcripcional de genes diana como HOXC8, HOXA9, MYT1 y CDKN2A.
• EED reconoce la histona H1 trimetilada en la lisina-26 (H1K26me3), lo que inhibe la actividad metiltransferasa del PRC2 sobre la H3K27 nucleosomal, mientras que el reconocimiento de H3K27me3 propaga la marca represiva.
• El complejo PRC2/EED-EZH2 también puede reclutar ADN metiltransferasas, estableciendo un enlace funcional entre la modificación de histonas y la metilación del ADN para una represión génica estable.
• EED se localiza en el núcleo y se asocia con los cromosomas, lo que es consistente con su función en la regulación de la cromatina.
• Está sujeta a múltiples modificaciones postraduccionales, incluyendo acetilación, fosforilación y metilación, que pueden modular su actividad e interacciones.
• EED se expresa ampliamente en los tejidos humanos, con niveles notablemente elevados observados en el cáncer de mama y de colon, lo que respalda su participación en la oncogénesis.

Orientación Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno abarca los 400 aminoácidos terminales N de EED humano; esta región puede detectar la proteína de longitud completa y ciertas isoformas. Valide la detección de cualquier variante de splicing específica en su sistema experimental.
• Para la transferencia Western (Western blotting, WB), el peso molecular predicho es de aproximadamente 50 kDa. Confirme el tamaño de la banda con los controles positivos y negativos apropiados.
• Se ha informado reactividad cruzada para humano, ratón y rata. Verifique la reactividad con otras especies si es necesario mediante la alineación de secuencias del inmunógeno.
• En inmunofluorescencia/ICC, realice una fijación estándar (p. ej., PFA al 4%) y permeabilización (p. ej., Triton X-100 al 0,1%). Se espera una tinción nuclear.
• Para inmunoprecipitación (IP), use perlas de Proteína A o G y optimice la relación anticuerpo-lisado. Preclear los lisados para reducir el fondo.
• Se indica la idoneidad para ELISA; titule el anticuerpo y use proteína recombinante EED o péptido como antígeno de recubrimiento.
• Dada la sobreexpresión de EED en ciertos cánceres, incluya líneas celulares de cáncer relevantes (p. ej., mama, colon) como controles positivos.

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