Anticuerpo monoclonal de conejo anti-Sharpin validado por KD para WB, IF/ICC, ELISA - Q9H0F6

Especificaciones y parámetros principales del producto

Información biológica: Función y localización de Sharpin

• Sharpin (proteína que interactúa con el dominio RH asociada a Shank), también conocida como SIPL1 (proteína 1 similar a proteína interactuante con Shank), es un componente del complejo de ensamblaje de cadenas de ubiquitina lineales (LUBAC). El LUBAC conjuga cadenas de poliubiquitina lineales de extremo a extremo en los sustratos, desempeñando un papel clave en la activación de NF-kappa-B y la regulación de la inflamación.
  Referencias relacionadas:
  PMID:21455173 PMID:21455180 PMID:21455181
• A través del LUBAC, Sharpin media la ubiquitinación lineal de IKBKG (NEMO) y RIPK1, que es esencial para las vías de señalización canónicas de NF-kappa-B y JNK. Esta modificación interfiere con la muerte celular inducida por TNF, evitando así la inflamación.
  Referencias relacionadas:
  PMID:21455173 PMID:21455180 PMID:21455181
• En la inmunidad innata, el LUBAC que contiene Sharpin conjuga cadenas de poliubiquitina lineales en la superficie de las bacterias que invaden el citosol, formando una cubierta de ubiquitina que actúa como señal de "comerme" para la xenofagia y promueve la activación de NF-kappa-B. El LUBAC extiende la ubiquitina preexistente en lugar de iniciar la ubiquitinación.
  Referencias relacionadas:
  PMID:28481331
• Sharpin también participa en la regulación de la señalización canónica de Wnt durante la angiogénesis, junto con la desubiquitinas OTULIN, mediante la modulación de eventos de ubiquitinación lineal.
  Referencias relacionadas:
  PMID:23708998
• La proteína se localiza predominantemente en el citoplasma y el citosol, y también se encuentra en las sinapsis, lo que coincide con sus funciones en la transducción de señales y la función neuronal.
• La expresión es más alta en el músculo esquelético y la placenta, con niveles más bajos en cerebro, corazón, colon, timo, bazo, riñón, hígado, intestino delgado, pulmón y leucocitos de sangre periférica. Sharpin se sobreexpresa en diversos tejidos tumorales, incluidos riñón, hígado, ovario y páncreas.
• Sharpin contiene dominios de dedo de zinc y es una fosfoproteína, lo que indica que está regulada por modificaciones postraduccionales. Está sujeta a splicing alternativo, generando múltiples isoformas.

Guía experimental y consejos técnicos

• El anticuerpo se generó frente a un fragmento N-terminal (aa 1-126) de la Sharpin humana. Esta región puede estar conservada en las isoformas conocidas; verifique la cobertura de isoformas si es necesario.
• Para Western blot (WB), se espera una banda de aproximadamente 40 kDa. Utilice lisados de control positivo como HeLa o HEK293, que expresan Sharpin.
• En inmunofluorescencia/inmunocitoquímica (IF/ICC), se espera un patrón de tinción principalmente citoplasmático y posiblemente sináptico. Optimice la fijación y permeabilización para el tipo celular de interés.
• La aplicación en ELISA es posible; realice una titulación adecuada del anticuerpo y utilice proteína recombinante de Sharpin como estándar.
• Dado que Sharpin participa en la señalización de TNF, la estimulación con TNF-alfa puede afectar su localización o formación de complejos, lo que puede analizarse con este anticuerpo.

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