Anticuerpo monoclonal de conejo KD Validado contra TFEB para WB, IHC-P, ELISA, ChIP - P19484

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de TFEB

• TFEB (factor de transcripción EB), también conocido como proteína de hélice-bucle-hélice básica clase E 35 (bHLHe35), pertenece a la subfamilia MiT/TFE de factores de transcripción de hélice-bucle-hélice básica con cremallera de leucina (bHLH-Zip), que incluye a MITF y TFE3.
• Funciona como regulador principal de la biogénesis lisosomal y la autofagia al unirse a los motivos de expresión y regulación coordinada lisosomal (CLEAR) (5′-GTCACGTGAC-3′) en los promotores de genes lisosomales y autofágicos. Referencias relacionadas: PMID:19556463, PMID:22692423
• La actividad de TFEB está estrictamente controlada por fosforilación sensible a nutrientes: en condiciones de alimentación, la fosforilación mediada por mTOR en múltiples residuos de serina retiene a TFEB en el citosol; la inanición o el estrés lisosomal inhiben a mTOR, lo que conduce a una desfosforilación rápida y una translocación nuclear. Referencias relacionadas: PMID:21617040, PMID:22343943, PMID:22576015
• En el núcleo, TFEB dimeriza consigo mismo o con otros miembros de MiT/TFE para activar la transcripción de genes diana implicados en la autofagia, el metabolismo lipídico, la homeostasis energética y la defensa inmune. Referencias relacionadas: PMID:1748288, PMID:29146937
• Además, TFEB desempeña un papel en la inmunidad adaptativa al regular la expresión de CD40L en las células T y en la inmunidad innata antibacterial a través de la alquilación mediada por itaconato que promueve su localización nuclear y la biogénesis lisosomal. Referencias relacionadas: PMID:35662396
• La localización subcelular es dinámica: principalmente citoplasmática cuando está fosforilado, se transloca al núcleo tras su activación; también puede asociarse a la membrana lisosomal.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno corresponde a los aminoácidos 50–173 de TFEB humano (NP_009093.1). Esta región se encuentra dentro del dominio de activación transcripcional N-terminal, que está relativamente conservado en humanos, ratones y ratas, lo que respalda la reactividad cruzada reportada. Para especies no listadas, se recomienda realizar una alineación de secuencias.
• Para Western blot, TFEB puede aparecer como un doblete entre 44 y 53 kDa debido a fosforilación diferencial o splicing alternativo; el uso de inhibidores de fosfatasas frescos en el buffer de lisis ayuda a preservar las isoformas fosforiladas. El anticuerpo ha sido validado por especificidad mediante knockdown (KD Validated).
• En inmunohistoquímica (IHC-P), las condiciones de recuperación de antígeno deben optimizarse para su tipo de tejido. Se puede observar tinción nuclear y citoplasmática dependiendo del estado de activación de TFEB.
• Para ChIP, asegúrese de que las condiciones de reticulación y fragmentación estén optimizadas para su tipo celular; el anticuerpo debe enriquecer eficientemente las regiones promotoras que contienen secuencias CLEAR o caja E.
• Realice los controles positivos y negativos apropiados (por ejemplo, lisados de knockout de TFEB, loci de genes diana conocidos) al establecer los ensayos.

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