[Validado por KO] Anticuerpo Monoclonal de Conejo Anti-Caspase-8 para WB, ELISA - Q14790

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de la Caspasa-8

• La Caspasa-8 (también designada FLICE, MACH, MCH5) es una caspasa iniciadora de 55 kDa de la familia de proteasas de cisteína-ácido aspártico, producida en múltiples isoformas mediante splicing alternativo; la isoforma 1 de longitud completa es catalíticamente activa, mientras que las isoformas más cortas pueden actuar como inhibidores dominantes negativos.
• Como iniciador clave de la apoptosis extrínseca, la Caspasa-8 es reclutada a través del adaptador FADD a los complejos de receptores de muerte (DISC) tras la estimulación por FAS o TNFRSF1A, lo que conduce a su dimerización, escisión autocatalítica y posterior activación de las caspasas efectoras descendientes (CASP3/7) y BID para ejecutar la muerte celular. Referencias relacionadas: PMID:8681376, PMID:8681377, PMID:9184224
• Más allá de la apoptosis, la Caspasa-8 regula negativamente la necroptosis al escindir RIPK1 en Asp-324, lo que inhibe la actividad quinasa de RIPK1 y previene la señalización necróptica e inflamatoria inducida por TNF. Referencias relacionadas: PMID:31827280, PMID:31827281
• La Caspasa-8 también media la piroptosis al escindir y activar la gasdermina-C (GSDMC) y la gasdermina-D (GSDMD), liberando sus dominios formadores de poros N-terminales que causan la ruptura de la membrana y la muerte celular inflamatoria. Referencias relacionadas: PMID:32929201, PMID:34012073
• Se localiza predominantemente en el citoplasma, pero se puede encontrar en el núcleo y en las lamelipodias; la fosforilación en Tyr-380, independiente de su actividad proteolítica, promueve la migración celular. Referencias relacionadas: PMID:18216014, PMID:27109099
• La Caspasa-8 se expresa ampliamente, con los niveles más altos de mRNA en leucocitos de sangre periférica, bazo, timo e hígado, y una expresión muy baja en cerebro, testículo y músculo esquelético.
• Además, la Caspasa-8 escinde PARP1 y PARP2 durante la apoptosis, y puede participar en vías de muerte celular citotóxica mediadas por Granzima B. Referencias relacionadas: PMID:8681376, PMID:8755496

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno corresponde a los residuos 200-300 dentro del dominio catalítico de la Caspasa-8 humana; esta región está presente en la proenzima de longitud completa y en la subunidad catalítica grande, por lo que el anticuerpo puede detectar tanto las formas sin procesar como las escindadas.
• Para Western blot, realice SDS-PAGE en condiciones reductoras; anticipe una banda principal a ~55 kDa (longitud completa) y, dependiendo del tratamiento celular, bandas más pequeñas que representan los fragmentos activos p18/p10. Incluya siempre marcadores de peso molecular.
• Se informa que este anticuerpo está validado por KO; considere usar lisados celulares con knockout de Caspasa-8 como control negativo para confirmar la especificidad de la banda en su sistema experimental.
• Para aplicaciones de ELISA, realice una titulación en tablero de ajedrez para establecer las concentraciones óptimas de antígeno de recubrimiento y anticuerpo; valide contra un estándar conocido si está disponible.
• Al estudiar la activación de la Caspasa-8, trate las células con inductores apropiados (p. ej., TNF-α + cicloheximida para apoptosis, o TNF-α + zVAD + mimético de Smac para necroptosis) y monitoree la cinética de escisión para distinguir entre las modalidades de muerte.
• La reactividad cruzada se informa solo para humano; si aplica a otras especies, alinee la secuencia del péptido inmunogénico con la Caspasa-8 del organismo objetivo para evaluar la reactividad potencial.

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