Anticuerpo Monoclonal de Conejo Anti-Caspasa-9 Validado por KO para WB, IF/ICC, ELISA - P55211

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de la Caspasa-9

• La Caspasa-9 es un miembro de la familia de proteasas de cisteína-ácido aspártico (caspasas) que funciona como una caspasa iniciadora clave en la vía apoptótica intrínseca. Está codificada por el gen CASP9 (GeneID: 842) y también se conoce como proteasa apoptótica Mch-6, APAF-3 e ICE-LAP6.
• Al unirse a Apaf-1, la caspasa-9 forma el apoptosoma y sufre activación. Luego escinde y activa las caspasas efectoras descendentes, principalmente la caspasa-3 y la caspasa-7, para ejecutar la apoptosis.
• La Caspasa-9 promueve la apoptosis inducida por daño en el ADN de manera dependiente de ABL1/c-Abl. También escinde proteolíticamente la polimerasa de (ADP-ribosa) (PARP) y BIRC6. La escisión de BIRC6 ocurre tras la inhibición de la unión BIRC6-caspasa por DIABLO/SMAC. Referencias relacionadas: PMID:36758105 PMID:36758106
• Una isoforma alternativamente empalmada (isoforma 2) carece de actividad catalítica y actúa como un inhibidor dominante negativo de la caspasa-9, proporcionando un mecanismo regulador.
• La expresión tisular es ubicua, con los niveles más altos en el corazón (específicamente en miocitos), expresión moderada en hígado, músculo esquelético y páncreas, y niveles bajos en otros tejidos.
• Como zimógeno, la caspasa-9 requiere escisión proteolítica para su activación. Además, se regula mediante fosforilación y ubiquitinilación. La proteína se clasifica como una proteasa de tioles y su estructura 3D se ha resuelto.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno utilizado para generar este anticuerpo cubre los aminoácidos 139–416, lo que incluye el dominio catalítico. Por lo tanto, el anticuerpo puede detectar tanto la proforma de longitud completa (~46 kDa) como los fragmentos activos escindidos. Considere incluir los controles apropiados al evaluar la activación de la caspasa.
• Para la transferencia Western (Western blotting), se espera una banda principal cerca de 46 kDa en muestras sin tratar; pueden aparecer bandas adicionales más pequeñas tras la inducción de la apoptosis. Valide el patrón específico en su sistema modelo.
• Este anticuerpo ha sido validado por KO, lo que indica una especificidad confiable para la Caspasa-9 en muestras de humano, ratón y rata. Es adecuado para detectar niveles endógenos.
• En experimentos de IF/ICC, la caspasa-9 se localiza predominantemente en el citoplasma, pero puede observarse en el núcleo bajo ciertas condiciones apoptóticas. Optimice los protocolos de fijación y permeabilización en consecuencia.
• Para aplicaciones de ELISA, evalúe este anticuerpo como parte de un par emparejado con otros clones anti-Caspasa-9 para lograr una sensibilidad y especificidad óptimas.

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