[Validado por KO] Anticuerpo Monoclonal de Conejo Anti-CDK4 para WB, IP, IHC-P, ELISA - P11802

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización del CDK4

• La cinasa dependiente de ciclina 4 (CDK4) es una proteína cinasa serina/treonina y un regulador clave de la transición G1/S del ciclo celular. Forma complejos con ciclinas de tipo D para fosforilar las proteínas de la familia del retinoblastoma (RB), liberando los factores de transcripción E2F y promoviendo la progresión del ciclo celular.
• A diferencia de otras CDK, la CDK4 es relativamente específica de la fase G1, donde hipofosforila RB1 al principio de G1, permitiendo la posterior hiperfosforilación por parte de los complejos ciclina E-CDK2.
• La CDK4 se localiza en el citoplasma, el núcleo y la membrana nuclear, y su translocación nuclear está regulada por el complejo ternario ciclina D/CDK4/CDKN1B.
• El splicing alternativo del CDK4 genera múltiples isoformas, y las modificaciones postraduccionales incluyen acetilación y fosforilación, que modulan su actividad y estabilidad.
• Más allá de las proteínas RB, la CDK4 fosforila SMAD3 de manera dependiente del ciclo celular, reprimiendo su actividad transcripcional y vinculando la señalización TGF-β con el control del ciclo celular.
• La CDK4 integra diversas señales mitogénicas y antimitogénicas, lo que la convierte en un nodo crítico en el control de la proliferación; su desregulación se observa frecuentemente en el cáncer y es un locus conocido de variantes de la enfermedad.
• Las palabras clave asociadas con CDK4 incluyen unión a ATP, unión a nucleótidos, transferasa, fosfoproteína y proteoma de referencia, destacando sus roles enzimáticos y regulatorios.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno para este anticuerpo comprende un péptido sintético correspondiente a los aminoácidos 204–303 del CDK4 humano, que se encuentra en la región C-terminal. Se espera, por tanto, que el anticuerpo reconozca el CDK4 de longitud completa y también puede detectar fragmentos C-terminales si están presentes.
• Para la transferencia Western (western blotting), se prevé una banda específica alrededor de 34 kDa, consistente con el peso molecular predicho del CDK4. Pueden producirse ligeras variaciones en el peso molecular observado debido a modificaciones postraduccionales o la expresión de isoformas.
• La validación por knockout (KO) proporciona una evidencia sólida de la especificidad. Como mejor práctica, considere incluir un lisado celular de CDK4 knockout como control negativo para confirmar la identidad de la banda en su sistema experimental.
• En la inmunoprecipitación, utilice condiciones de lisis nativas para preservar las interacciones proteína-proteína si está estudiando complejos de CDK4. El origen monoclonal de conejo del anticuerpo a menudo asegura una alta afinidad y consistencia entre lotes.
• Para experimentos de inmunohistoquímica (parafina), puede ser necesaria la recuperación de antígenos; se recomienda la optimización del tampón de recuperación y el protocolo para cada tipo de tejido.
• Aunque el anticuerpo está validado para múltiples especies (humano, ratón, rata, mono), verifique siempre la reactividad cruzada en su muestra específica debido a posibles variaciones en la secuencia.

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