[KO Validado] Anticuerpo policlonal anti-HER2/ErbB2 para WB, ELISA - P04626

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de HER2/ErbB2

• HER2/ErbB2 es una tirosina-proteína cinasa receptora codificada por el gen ERBB2 (GeneID: 2064) y pertenece a la familia de receptores del factor de crecimiento epidérmico (EGFR/ErbB). La proteína de longitud completa es una proteína de membrana de tipo I de paso único, compuesta por 1255 aminoácidos, con un peso molecular previsto de 137,9 kDa (observado aproximadamente en 138 kDa).
• Funciona como correceptor en complejos receptor-neuregulina, esenciales para la señalización dependiente de ligando, pero requiere heterodimerización con otros miembros de la familia ErbB (p. ej., EGFR, ErbB3, ErbB4) para la unión de ligandos de alta afinidad y la activación de la cinasa.
• La señalización de HER2 regula el crecimiento y la estabilización de los microtúbulos periféricos mediante la vía MEMO1-RHOA-DIAPH1, inhibiendo GSK3B y promoviendo la asociación de APC y CLASP2 con la membrana, lo que a su vez facilita la captura y estabilización de los microtúbulos.
• En el núcleo, HER2 actúa como regulador transcripcional, uniéndose al promotor de PTGS2/COX-2 (secuencia 5’-TCAAATTC-3’) para activar la transcripción, y también promueve la expresión de CDKN1A mediante la participación de STAT3 y SRC, así como la transcripción de genes de rRNA por la ARN Pol I, potenciando la síntesis de proteínas y el crecimiento celular.
• La localización subcelular incluye la membrana celular, la membrana de las ondulaciones, el endosoma temprano, el citoplasma (región perinuclear) y el núcleo, lo que refleja sus diversas funciones de señalización y transcripción.
• HER2 está sobreexpresado en diversos tejidos tumorales, incluidos los cánceres primarios de mama, intestino delgado, esófago, riñón y cavidad oral, lo que lo convierte en un biomarcador y una diana terapéutica críticos.
• Las principales modificaciones postraduccionales incluyen la fosforilación (fosfoproteína) y la glicosilación; la proteína también presenta un péptido señal, enlaces disulfuro e isoformas generadas por iniciación y corte y empalme alternativos.
• Las palabras clave de UniProt destacan sus funciones biológicas: activador, corte y empalme alternativo, unión a ATP, membrana celular, variante asociada a enfermedad, cinasa, receptor, señal, regulación de la transcripción, transferasa y transmembrana.

Guía experimental y consejos técnicos

• La secuencia del inmunógeno (aa 1156–1255) se encuentra en el dominio citoplasmático C-terminal de HER2; por lo tanto, se espera que este anticuerpo reconozca la forma de longitud completa (~138 kDa) en Western blot (WB), con posible detección de isoformas truncadas o generadas por corte y empalme alternativo si conservan este epítopo.
• Para WB, utilice condiciones reductoras; la proteína madura glicosilada y fosforilada puede migrar ligeramente por encima. Valide la especificidad de la banda utilizando líneas celulares HER2 positivas y negativas (p. ej., SK-BR-3 frente a MCF-7) y, si están disponibles, lisados validados mediante KO, tal como se indica en la validación del producto.
• En aplicaciones de ELISA, considere utilizar el recubrimiento con péptidos o la captura directa del antígeno debido a la localización intracelular del epítopo. Optimice las condiciones de recubrimiento y las diluciones del anticuerpo en matrices de muestra pertinentes.
• Debido a su alta expresión en tumores, los lisados de líneas celulares de cáncer de mama o de tejidos tumorales pueden producir señales intensas; incluya controles de carga adecuados y normalice respecto a la proteína total.

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