Anticuerpo Policlonal de Conejo Anti-HMGB1 Validado por KO para WB, IHC-P, ELISA - P09429

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de HMGB1

• HMGB1 (proteína de grupo de alta movilidad B1), codificada por el gen HMGB1, es una proteína ubiquitaria asociada a la cromatina no histónica que también se secreta activamente o se libera pasivamente para actuar como un patrón molecular asociado a peligros (DAMP) y como citocina/quimioquina.
• En el núcleo, HMGB1 se une preferentemente a estructuras de ADN no canónicas (hebra simple, cruciforme, superenrollado y ADN-Z) y dobla el ADN para facilitar la remodelación de la cromatina y mejorar el acceso de los factores de transcripción (PubMed:20123072). Participa en múltiples vías de reparación del ADN, incluidas la reparación por escisión de nucleótidos, la reparación de errores de apareamiento y la reparación por escisión de bases (PubMed:15014079, PubMed:16143102, PubMed:17803946, PubMed:19360789, PubMed:19446504). Referencias relacionadas: PMID:20123072 PMID:15014079 PMID:16143102 PMID:17803946 PMID:19360789 PMID:19446504
• En el citoplasma, HMGB1 promueve la autofagia al interrumpir competitivamente la interacción BECN1:BCL2 (PubMed:20819940) y participa en la autofagia inducida por estrés oxidativo (PubMed:21395369). Referencias relacionadas: PMID:20819940 PMID:21395369
• Extracelularmente, el estado redox de HMGB1 dicta su función: la HMGB1 totalmente reducida actúa como quimioquina, la forma disulfuro como citocina proinflamatoria y la forma sulfonilo promueve la tolerancia inmunológica (PubMed:23446148, PubMed:23519706, PubMed:23994764). Se une a múltiples receptores de superficie, incluidos AGER/RAGE, TLR2 y TLR4, para inducir la liberación de citocinas y el reclutamiento de células inmunitarias (PubMed:12765338, PubMed:18354232, PubMed:19264983, PubMed:15607795, PubMed:20547845). Referencias relacionadas: PMID:23446148 PMID:23519706 PMID:23994764 PMID:12765338 PMID:18354232 PMID:19264983 PMID:15607795 PMID:20547845
• HMGB1 facilita la entrada de SARS-CoV y SARS-CoV-2 al regular la expresión de los receptores virales ACE2 y CTSL a través de la modulación de la cromatina (PubMed:33147444) y es necesario para la reticulofagia inducida por ORF3A de SARS-CoV-2 (PubMed:35239449). Referencias relacionadas: PMID:33147444 PMID:35239449
• Las modificaciones postraduccionales, incluidas la acetilación, la fosforilación, la ADP-ribosilación y la oxidación, regulan dinámicamente la localización subcelular, la afinidad de unión al ADN y las actividades inmunomoduladoras de HMGB1.
• HMGB1 se expresa de forma ubicua y se ha detectado en plaquetas (PubMed:11154118). Referencias relacionadas: PMID:11154118

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno abarca los aminoácidos 69-168, cubriendo la caja HMG B conservada y parte de la cola C ácida. Esta región es altamente conservada entre humanos, ratones y ratas, lo que respalda la reactividad cruzada del anticuerpo.
• Para Western blot, se espera una banda alrededor de 25 kDa; tenga en cuenta que las modificaciones postraduccionales pueden causar ligeras variaciones. Se ha realizado una validación por knockout; considere incluir los controles positivos y negativos apropiados.
• Para IHC-P, puede ser necesaria la recuperación de antígenos. Optimice las condiciones de tinción utilizando controles de tejido positivo conocidos (por ejemplo, tejidos con alta expresión de HMGB1 como órganos linfoides o tumores).
• En ELISA, el anticuerpo se puede utilizar para captura o detección; sin embargo, el emparejamiento con un anticuerpo de detección coincidente debe validarse para el formato de ensayo específico.
• Debido a que HMGB1 es un DAMP que puede liberarse de células dañadas, evite la lisis celular excesiva o el daño tisular durante la preparación de la muestra para minimizar el ruido de fondo.

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