[Validado KO] Anticuerpo monoclonal de conejo anti-LAMP2 para WB, IHC-P, IF/ICC, FC, ELISA - P13473

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de LAMP2

• LAMP2 (glicoproteína de membrana asociada a lisosomas 2) es una proteína transmembrana de tipo I altamente glicosilada, también conocida como CD107b o LGP-96. Por empalme alternativo se producen tres isoformas principales (LAMP-2A, -2B y -2C), cada una con distintas distribuciones tisulares y funciones en la actividad lisosomal.
• Desempeña un papel esencial en la biogénesis de lisosomas, la regulación del pH lisosomal y la autofagia. LAMP2 inhibe directamente el canal de protones TMEM175, facilitando la acidificación lisosomal necesaria para una actividad óptima de las hidrolasas. Referencias relacionadas: PMID:11082038, PMID:18644871, PMID:24880125, PMID:37390818
• LAMP2 es un receptor central en la autofagia mediada por chaperonas (CMA). Se une a las proteínas sustrato (por ejemplo, GAPDH, GPX4, NLRP3) que han sido reconocidas por la chaperona HSC70, y las dirige para su degradación lisosomal, especialmente en condiciones de ayuno. Referencias relacionadas: PMID:11082038, PMID:18644871, PMID:24880125, PMID:36586411
• Durante la macroautofagia, LAMP2 es necesaria para la fusión de autofagosomas con lisosomas; las células que carecen de LAMP2 no pueden reclutar STX17 a los autofagosomas, lo que impide la degradación de la carga autofágica. Referencias relacionadas: PMID:27628032
• LAMP2 contribuye a la inmunidad adaptativa al facilitar la presentación de antígenos exógenos mediada por MHC de clase II; promueve la generación de péptidos antigénicos dentro del compartimento endosomal/lisosomal. Referencias relacionadas: PMID:15894275, PMID:20518820
• Durante la infección por virus de las paperas, LAMP2 favorece la escisión de la proteína de fusión viral F mediada por FURIN, al interactuar tanto con FURIN como con la proteína viral sin procesar.
• LAMP2 se localiza principalmente en la membrana de los lisosomas y, en menor medida, en endosomas, autofagosomas y la membrana plasmática.
• Expresión tisular específica de isoformas: LAMP-2A es abundante en placenta, pulmón e hígado; LAMP-2B se expresa ampliamente en tejidos como bazo, timo, próstata y testículo; LAMP-2C se encuentra en intestino delgado, colon, corazón, cerebro y músculo esquelético. Referencias relacionadas: PMID:26856698, PMID:7488019

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno corresponde al dominio luminal (aminoácidos 29–375) de la LAMP2 humana, dirigida a un epitopo extracelular accesible en muestras no permeabilizadas para tinción de superficie (por ejemplo, FC) y en muestras permeabilizadas para detección total.
• Para Western blotting, el peso molecular predicho de la proteína core es de 45 kDa, pero la extensa glicosilación enlazada a N y O suele producir una banda ancha que migra entre ~90–110 kDa; utilice un control positivo adecuado como lisado total de células HeLa o HepG2.
• En inmunofluorescencia e IHC, las condiciones de fijación/permeabilización deben optimizarse para acceder al compartimento de membrana lisosomal; considere la cotinción con marcadores lisosomales (por ejemplo, LAMP1) para confirmar la localización.
• Para citometría de flujo, la tinción intracelular (FC intra) requiere permeabilización celular; la compatibilidad con anticuerpos secundarios conjugados con fluoróforos y protocolos de fijación debe validarse en su contexto celular específico.
• Este anticuerpo ha sido validado para confirmación de knockout; incluya siempre controles adecuados de knockout o knockdown para verificar la especificidad del anticuerpo en su ensayo.

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