Anticuerpo policlonal de conejo anti-PHD2/EGLN1 validado mediante KO para WB, IHC-P, IF/ICC y ELISA - Q9GZT9

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de PHD2/EGLN1

• El homólogo 1 de Egl nine (EGLN1), conocido comúnmente como PHD2, es una prolil-hidroxilasa del factor inducible por hipoxia (HIF) y el principal sensor de oxígeno en condiciones normóxicas.
• PHD2 cataliza la hidroxilación de residuos de prolina específicos dentro de los dominios de degradación dependientes del oxígeno de HIF1A y HIF2A, lo que conduce a la ubiquitinación mediada por VHL y a la degradación proteasómica.
• En condiciones de hipoxia, la actividad de PHD2 disminuye, permitiendo la estabilización de HIFα, su translocación nuclear y la activación transcripcional de genes implicados en la angiogénesis, la eritropoyesis y la adaptación metabólica.
• La enzima pertenece a la familia de dioxigenasas EGLN y contiene un motivo de dedo de zinc; requiere hierro, 2-oxoglutarato y ascorbato como cofactores para su función catalítica.
• El empalme alternativo produce múltiples isoformas, y se han descrito modificaciones postraduccionales como acetilación, fosforilación y S-nitrosilación.
• A nivel subcelular, PHD2 se localiza predominantemente en el citoplasma, aunque también puede detectarse en el núcleo.
• PHD2 se expresa ampliamente, con niveles más altos en el músculo esquelético, el corazón, el cerebro y el riñón; también se encuentra en miocitos cardíacos, células endoteliales aórticas y músculo liso de las arterias coronarias.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es un péptido sintético correspondiente a la región N-terminal (aa 1-100) de PHD2 humano; considere utilizar un péptido bloqueante para los controles de especificidad.
• Para la transferencia Western, suele utilizarse un rango de dilución inicial de 1:500–1:2000; valide la dilución óptima en su sistema de muestras y tenga en cuenta que se espera una banda de aproximadamente 46 kDa.
• Para IHC-P, puede ser necesaria la recuperación antigénica; pruebe protocolos basados en citrato o EDTA e incluya controles positivos adecuados (por ejemplo, tejido cardíaco o músculo esquelético).
• Para IF/ICC, deben optimizarse las condiciones de fijación y permeabilización; PHD2 se detecta en el citoplasma y el núcleo.
• El anticuerpo ha sido validado en muestras KO; incluya siempre controles de knockout o knockdown al investigar la especificidad de la diana.

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