[KO Validado] Anticuerpo monoclonal de conejo contra el fragmento N-terminal de Gasdermin E clivada para WB, IHC-P, ELISA - O60443

Especificaciones y parámetros principales del producto

Contexto biológico: Función y localización de Gasdermin E

• Gasdermin E (GSDME), también conocida como DFNA5 o ICERE-1, es un miembro de la familia de proteínas formadoras de poros gasdermina. Se expresa como un precursor que se cliva para liberar un fragmento N-terminal activo, y se producen múltiples isoformas por empalme alternativo.
• Después del clivaje por caspasa-3 (CASP3) o granzima B (GZMB) en el Asp270, el fragmento N-terminal se transloca a la membrana plasmática, se oligomeriza y forma poros de 10 a 15 nm de diámetro interno, lo que desencadena la piroptosis y la liberación de citoquinas inflamatorias como IL-1β e IL-16. Referencias relacionadas: PMID:27281216, PMID:28459430, PMID:32188940, PMID:33852854
• La piroptosis mediada por GSDME actúa como un mecanismo de supresión tumoral: la granzima B liberada por las células natural killer (NK) cliva GSDME en las células tumorales, induciendo la piroptosis y una respuesta de inmunidad antitumoral robusta. Referencias relacionadas: PMID:21522185, PMID:32188940, PMID:31953257
• Corriente abajo de la vía apoptótica mitocondrial y el daño del ADN, GSDME puede cambiar la apoptosis hacia necrosis secundaria y piroptosis, parcialmente a través de la señalización de p53/TP53. Referencias relacionadas: PMID:28045099, PMID:16897187
• GSDME presenta actividad bactericida y promueve la piroptosis en respuesta a infecciones microbianas, incluyendo la piroptosis placentaria inducida por el virus del Zika que afecta el desarrollo fetal. Referencias relacionadas: PMID:27281216
• En términos de localización subcelular, la GSDME de longitud completa se encuentra principalmente en el citoplasma, mientras que el fragmento N-terminal clivado se localiza en la membrana celular donde forma los poros.
• GSDME se expresa en la cóclea y en niveles bajos en muchos tejidos, con la mayor expresión en la placenta. Las mutaciones en este gen se asocian a la hipoacusia autosómica dominante no sindrómica. Referencias relacionadas: PMID:9771715
• Las modificaciones postraduccionales, incluyendo la palmitoilación y la formación de enlaces isopéptidos, pueden regular la activación de GSDME y su inserción en la membrana.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno del anticuerpo está diseñado alrededor del sitio de corte Asp270, por lo que es específico para el fragmento N-terminal. Valide la especificidad en su sistema experimental usando controles positivos y negativos adecuados (por ejemplo, muestra sin tratar vs muestra tratada con inductores de apoptosis/piroptosis).
• Para Western blot, se esperan múltiples bandas debido al precursor sin clivar (~55 kDa) y los fragmentos clivados (N-terminal de ~11 kDa y 35 kDa, dependiendo de la isoforma). Optimice las condiciones de carga y detección para distinguir estas formas.
• Para IHC-P, realice la recuperación de antígeno y pruebe una serie de diluciones para obtener un tinción óptima. El anticuerpo ha sido validado para muestras humanas; no se ha reportado reactividad cruzada con otras especies, por lo que confirme la reactividad si usa tejidos no humanos.
• Para ELISA, considere emparejarlo con un anticuerpo específico del extremo C-terminal para realizar un ELISA sándwich y cuantificar GSDME clivada. Realice experimentos piloto para establecer la sensibilidad y el rango dinámico.
• En estudios de piroptosis, monitorice el clivaje como marcador de lectura; combínelo con ensayos de actividad de caspasa-3 o detección de granzima B para obtener conocimientos mecanicistas.

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