Anticuerpo monoclonal de conejo anti-MDA5 para WB, ELISA - Q9BYX4

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de MDA5

• Codifica la proteína 1 que contiene el dominio de helicasa C inducida por interferón (IFIH1), también conocida como MDA5, Helicard y RLR-2. Es un receptor inmune innato citoplásmico que reconoce ARN viral de doble cadena y ARNm sin caperuza con deficiencia de 2'-O-metilación.
• Tras la unión del ligando, MDA5 interactúa con MAVS en las mitocondrias, desencadenando la fosforilación mediada por TBK1/IKBKE y la activación de IRF3/IRF7, lo que conduce a la producción de interferón tipo I y citoquinas proinflamatorias. Referencias relacionadas: PMID:28594402, PMID:32169843, PMID:33727702
• Actúa como un sensor principal para picornavirus (p. ej., EMCV, rinovirus), coronavirus (incluyendo SARS-CoV-2) y otros virus de ARN como los virus del dengue y del Nilo Occidental. Referencias relacionadas: PMID:28606988, PMID:33440148, PMID:33514628
• Se localiza en el citoplasma, mitocondrias y núcleo, en consonancia con su función en la detección de ARN viral y la transducción de señales.
• Pertenece a la familia de receptores tipo RIG-I (RLR), contiene dos dominios CARD en el extremo N-terminal, un dominio de helicasa DExD/H-box y un dominio regulador en el extremo C-terminal. El dominio de helicasa se une al ARN de manera dependiente de ATP.
• Las modificaciones postraduccionales incluyen fosforilación y ubiquitinación, que regulan su actividad y estabilidad.
• Se expresa ampliamente con niveles más altos en placenta, páncreas y bazo; poco en cerebro, testículos y pulmón.
• Las mutaciones asociadas a enfermedades en IFIH1 están relacionadas con el síndrome de Aicardi-Goutières y la diabetes mellitus, lo que destaca su papel en la autoinmunidad.
• Además, MDA5 puede desempeñar un papel en la inhibición del crecimiento y la apoptosis en células tumorales y mejorar la función de las células asesinas naturales (NK).

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno abarca una región del extremo C-terminal (aa 900-1000) de MDA5 humano, que está conservada en humano, ratón y rata, respaldando la reactividad cruzada reportada. Valide la reactividad específica de especie en matrices de muestra relevantes.
• Para Western blot, el anticuerpo puede detectar bandas a ~117 kDa (MDA5 de longitud completa) y posiblemente a ~25 kDa; es recomendable utilizar un rango amplio de peso molecular y controles positivos como células HeLa o A549 tratadas con interferón.
• En ELISA, valore el anticuerpo contra MDA5 recombinante o el péptido inmunizante para determinar las concentraciones de trabajo óptimas; asegure pasos adecuados de bloqueo y lavado.
• Dado que MDA5 es inducible por interferón, considere estimular células con IFN-alfa/beta o imitadores virales (p. ej., poli(I:C)) para aumentar la expresión del antígeno antes de la lisis.

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