Anticuerpo monoclonal de conejo contra MonoMetil-Histona H3-K18 (Q16695/P68431) para ChIP y CUT&Tag | WB, IHC-P, IF, ELISA

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de la histona H3

Las histonas son los principales componentes proteicos de la cromatina y actúan como carretes alrededor de los cuales se enrolla el ADN. La histona H3, junto con H2A, H2B y H4, forma el núcleo del nucleosoma. Estos nucleosomas compactan el ADN y regulan su accesibilidad para la transcripción, replicación, reparación y estabilidad cromosómica. La cola N-terminal de la histona H3 está sujeta a numerosas modificaciones postraduccionales (PTM), incluidas la metilación, acetilación, fosforilación y otras, que en conjunto constituyen el "código de histonas" y orquestan la dinámica de la cromatina y la expresión génica.

La lisina 18 (K18) de la histona H3 (que corresponde a la posición 19 en el precursor) es un residuo clave que puede ser monometilado. Esta modificación, junto con otras PTM en este sitio, influye en la unión de proteínas efectoras y modula la estructura de la cromatina. Si bien la acetilación de K18 a menudo se vincula con la activación transcripcional, los estados de metilación pueden tener efectos dependientes del contexto. La monometilación de H3K18 ha sido implicada en la regulación de la expresión génica y el mantenimiento de la función adecuada de la cromatina.

Referencias relacionadas: PMID:16267050, PMID:16627869, PMID:17194708.

Las entradas SWISS Q16695 (Histona H3.1t) y P68431 (Histona H3.1) representan dos variantes de la histona H3 humana. La Q16695 se expresa predominantemente en células testiculares, donde reemplaza a la H3.1 canónica durante la espermatogénesis. La P68431 es una histona dependiente de la replicación que se expresa en células somáticas y está ampliamente distribuida. Ambas variantes se localizan en el núcleo y el cromosoma.

Referencias relacionadas: UniProt Q16695, UniProt P68431.

Guía experimental y consejos técnicos

• El anticuerpo se generó utilizando un péptido sintético monometilado alrededor de la K18. Para garantizar la especificidad por la forma monometilada, considere realizar un ensayo de competencia de péptidos utilizando los péptidos correspondientes no modificados o di/tri-metilados durante la validación inicial.
• Para Western blot (WB), se recomiendan extractos de histonas de células humanas, de ratón o de rata como material de partida. Se espera una banda específica alrededor de 15 kDa. Ejecute controles apropiados, incluido un anticuerpo contra H3 total, para confirmar una carga igualitaria.
• En experimentos de inmunoprecipitación de cromatina (ChIP) y CUT&Tag, la titulación del anticuerpo es fundamental. Es recomendable incluir regiones genómicas de control positivo conocidas por albergar la monometilación de H3K18 (si están disponibles) y loci de control negativo. Las condiciones de entrecruzamiento pueden influir en la accesibilidad del epítopo; considere protocolos de ChIP nativos y entrecruzados.
• Para inmunohistoquímica (IHC-P) e inmunofluorescencia (IF/ICC), es posible que las condiciones de recuperación de antígeno necesiten optimización. Se recomienda utilizar muestras de tejido o células con niveles documentados de H3K18me1 para establecer la especificidad de la tinción.
• Las aplicaciones de ELISA y dot blot (DB) pueden utilizarse para verificaciones rápidas del título del anticuerpo y la especificidad frente a varios péptidos en diferentes estados de metilación.

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