mAb de conejo contra MonoMetil-Histona H3-K36 (Q16695/P68431) para WB, DB, IHC-P, ELISA

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de la histona H3

La histona H3 es un componente central del nucleosoma, que envuelve y compacta el ADN en cromatina. Esta compactación limita la accesibilidad del ADN a las maquinarias celulares que requieren al ADN como molde. En consecuencia, las histonas desempeñan un papel central en la regulación de la transcripción, la reparación del ADN, la replicación del ADN y la estabilidad cromosómica. La accesibilidad del ADN se regula a través de un conjunto complejo de modificaciones postraduccionales de las histonas, denominado colectivamente código de histonas, y mediante la remodelación de nucleosomas. Referencias relacionadas: UniProt Q16695, UniProt P68431

Múltiples genes codifican variantes de la histona H3. Las observaciones y alias del producto incluyen H3C2, H3C3, H3C4, H3C6, H3C7, H3C8, H3C10, H3C11, H3C12 y HIST1H3A, que reflejan los diversos genes de histona H3.1 dependientes de la replicación. Además, la variante específica de testículo H3.1t (H3t, codificada por H3-4 / HIST3H3) está representada por la accesión SWISS Q16695. Estas variantes son muy similares en secuencia. Referencias relacionadas: UniProt Q16695, UniProt P68431

Subcelularmente, la histona H3 se localiza en el núcleo y es un componente principal de los cromosomas. Su presencia es ubicua en los nucleosomas de todo el genoma. Referencias relacionadas: UniProt Q16695, UniProt P68431

Las modificaciones postraduccionales de la histona H3, incluidas la metilación, acetilación, fosforilación y otras, ajustan finamente la estructura y función de la cromatina. La monometilación en la lisina 36 (K36) es una de estas modificaciones. Este anticuerpo detecta específicamente la forma monometilada de K36 y se generó utilizando un inmunógeno de péptido sintético monometilado dirigido a este residuo. Referencias relacionadas: UniProt Q16695, UniProt P68431

Guía experimental y consejos técnicos

• El peso proteico predicho de la histona H3 es de aproximadamente 15 kDa. Sin embargo, debido a su naturaleza altamente básica, la histona H3 suele migrar con un peso molecular aparente ligeramente mayor en SDS-PAGE. Verifique el patrón de migración específico en su sistema de muestra.
• Este anticuerpo se obtuvo contra un péptido sintético monometilado alrededor de K36. Se espera que reconozca específicamente la forma monometilada por encima de los estados no modificados u otros estados de metilación. Confirme la especificidad mediante ensayos de competición con péptidos o comparando las señales de lisados celulares tratados con agentes modificadores de la metilación.
• Para Western blot (WB) y dot blot (DB), considere usar protocolos de extracción de histonas que enriquezcan las proteínas nucleares para mejorar la sensibilidad de detección.
• En inmunohistoquímica (IHC-P, para tejido parafinado), puede ser necesario optimizar las condiciones de recuperación de antígeno (por ejemplo, tampón de citrato pH 6,0 o tampón EDTA pH 9,0). Incluya tejidos de control positivo y negativo conocidos para evaluar la especificidad de la tinción.
• ELISA se puede utilizar para cribado de alto rendimiento o experimentos de titulación. Combine este anticuerpo con un anticuerpo secundario anti-conejo adecuado conjugado con HRP u otra enzima reportera para la detección.

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