Anticuerpo monoclonal de conejo frente a Histona H3-K4 monometilada (Q16695/P68431) para WB, ChIP, IF/ICC e investigación epigenética

Especificaciones y parámetros principales del producto

Contexto biológico: Función y localización de la histona H3

La histona H3 es un componente fundamental del nucleosoma, la estructura que enrolla y compacta el ADN en la cromatina. Esta compactación limita la accesibilidad del ADN a la maquinaria celular que necesita al ADN como molde, por lo que desempeña un papel central en la regulación de la transcripción, la reparación del ADN, la replicación del ADN y la estabilidad cromosómica. La accesibilidad del ADN se ajusta finamente mediante un conjunto complejo de modificaciones postraduccionales en las histonas, conocido como código de histonas, y por el remodelado de nucleosomas.

La histona H3 se localiza en el núcleo y es parte integral de los cromosomas. Hay dos variantes relevantes aquí: la histona canónica H3.1 (codificada por múltiples genes como H3C1, H3C2, etc., SWISS P68431) se expresa de forma ubicua, mientras que la histona H3.1t (SWISS Q16695) es específica de testículo. Ambas comparten la misma función fundamental en la estructura de la cromatina.

La lisina 4 de la histona H3 (H3K4) es un sitio principal para diversas modificaciones postraduccionales, que incluyen mono-, di- y trimetilación, acetilación y otras. La monometilación de H3K4 (H3K4me1) se asocia típicamente a regiones potenciadoras y transcripción génica activa. Este anticuerpo se generó frente a un péptido monometilado que rodea H3K4, por lo que presenta especificidad para este estado de modificación.

Referencias relacionadas: PMID:16267050, PMID:16457588, PMID:17194708.

Guía experimental y consejos técnicos

• Este anticuerpo es específico para H3K4 monometilado. Para obtener resultados óptimos, incluya muestras de control positivo y negativo (por ejemplo, péptidos con K4 sin modificar, mono-, di- o trimetilado) para confirmar la especificidad.
• Western Blot (WB): Utilice extractos nucleares o lisados celulares totales. Se espera una banda de aproximadamente 16 kDa. Determine empíricamente la dilución óptima del anticuerpo primario (por ejemplo, rango inicial 1:500–1:2000) y acóplelo a un anticuerpo secundario conjugado a HRP apropiado.
• Inmunoprecipitación de cromatina (ChIP): Adecuado para ChIP. Realice la reticulación de la cromatina, la fragmentación y la inmunoprecipitación con el anticuerpo. Valide el enriquecimiento mediante qPCR en loci diana conocidos de H3K4me1.
• Inmunofluorescencia (IF/ICC): Fije y permeabilice las células de forma adecuada. Se espera una tinción nuclear exclusiva. Realice una contratinción con DAPI o un colorante similar para confirmar la localización.
• IHC-P: Puede ser necesaria la recuperación de antígeno; optimice las condiciones para cada tipo de tejido.
• Dot Blot (DB) y ELISA: Asegúrese de optimizar la concentración de péptido y las condiciones de bloqueo para minimizar la unión no específica.
• Reactividad cruzada: Este anticuerpo reconoce una amplia gama de especies, incluidas plantas (Arabidopsis, arroz, trigo). Para muestras de plantas, ajuste los protocolos de extracción debido a la pared celular rígida y optimice las condiciones de detección.

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