mAb Conejo MonoMethyl-Histona H3-K9 | Q16695 / P68431 – Anticuerpo Específico de Metilación para WB, ChIP, ELISA y Más

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de la Histona H3

La histona H3 es un componente central del nucleosoma, la unidad repetitiva fundamental de la cromatina. Desempeña un papel central en la compactación del ADN y la regulación de su accesibilidad a las maquinarias de transcripción, replicación y reparación.

Una característica clave de la biología de la histona H3 es la hipótesis del "código de histonas": combinaciones específicas de modificaciones postraduccionales (MPT) en su cola N-terminal flexible gobiernan distintos estados de la cromatina y procesos nucleares posteriores. Entre estas MPT, la metilación en la lisina 9 (H3K9me) es una de las marcas más intensamente estudiadas, a menudo vinculada con la represión transcripcional, la formación de heterocromatina y la estabilidad genómica.

Referencias relacionadas: PMID:11242053 PMID:16267050 PMID:17194708

La lisina en la posición 9 de la proteína H3 madura (correspondiente a la posición 10 de UniProt) puede encontrarse en diferentes estados de metilación (mono-, di- o tri-metilada), cada uno con consecuencias biológicas distintas. La H3K9 monometilada (H3K9me1) se enriquece principalmente en promotores y potenciadores de genes activos en regiones eucromáticas, donde ajusta finamente la actividad transcripcional, aunque también se ha detectado en heterocromatina pericéntrica en contextos celulares específicos.

Referencias relacionadas: PMID:16185088 PMID:16457588

La histona H3 existe como múltiples variantes codificadas por diferentes genes. La H3.1 canónica (SWISS P68431) se expresa de manera dependiente de la replicación y se incorpora a la cromatina durante la fase S, mientras que la variante específica de testículo H3.1t/H3-4 (Q16695) se expresa únicamente en células testiculares y puede contribuir a la dinámica de la cromatina específica de la espermatogénesis. El epítopo de este anticuerpo abarca una región altamente conservada entre las variantes de H3, lo que permite una detección amplia.

Referencias relacionadas: Ninguna (especificidad tisular basada en registros de secuencias)

Subcelularmente, la histona H3 se localiza en el núcleo y está estrechamente asociada con el ADN cromosómico.

Este anticuerpo reconoce específicamente la forma monometilada de H3K9. Debido a la naturaleza conservada del sitio de modificación, se prevé que reaccione con múltiples especies y subtipos de H3.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• Preparación de muestras para WB: Considere usar histonas extraídas con ácido o lisados enriquecidos en núcleo para mejorar la relación señal/ruido. Para lisados celulares totales, incluya cócteles apropiados de inhibidores de proteasas y evite condiciones de desnaturalización que puedan eliminar las modificaciones de histonas.
• Validación de especificidad: En cualquier ensayo, confirme la especificidad del anticuerpo utilizando péptidos sintéticos monometilados frente a no metilados de K9 en un experimento de competición con péptido (dot blot o ELISA). Una matriz de proteínas recombinantes de histona H3 con estados de metilación definidos también puede servir como control riguroso.
• Optimización de ChIP: Para la inmunoprecipitación de cromatina, el tiempo de entrecruzamiento, la cantidad de anticuerpo y las condiciones de sonicación deben determinarse empíricamente. La alta avidez del anticuerpo por la marca monometil puede requerir menos anticuerpo por reacción en comparación con los anticuerpos pan-H3. Incluya siempre un control de bloqueo con péptido específico de monometil.
• Consideraciones para IHC e IF: La fijación y la recuperación de antígeno pueden influir en la accesibilidad del epítopo. Para IHC-P, los protocolos estándar con tejido fijado en formalina e incluido en parafina (FFPE) con un paso de recuperación de antígeno mediado por calor (buffer de citrato, pH 6.0) suelen funcionar bien; sin embargo, se recomienda realizar pruebas preliminares. En inmunofluorescencia, una breve permeabilización con metanol puede mejorar la tinción nuclear.
• Aplicaciones ELISA/dot blot: Recubra las placas con péptido H3(1-21) monometilado o H3K9me1 recombinante de longitud completa para evaluar la afinidad de unión y la linealidad. Utilice péptido conjugado con BSA como alternativa.
• Reactividad cruzada de especies: Aunque se prevé una amplia reactividad, recomendamos validar el anticuerpo en su sistema de muestra específico (por ejemplo, ratón, rata u otra especie relevante) antes de experimentos a gran escala.

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