Anticuerpo Monoclonal de Conejo MonoMethyl-Histona H3-K9 (Q16695/P68431) para WB, IHC, ChIP, ELISA

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de la Histona H3

La histona H3 es un componente central del nucleosoma, la unidad repetitiva fundamental de la cromatina. Los nucleosomas envuelven y compactan el ADN, regulando así el acceso para la transcripción, replicación y reparación. Tanto la histona H3.1 canónica dependiente de replicación (UniProt P68431) como la variante específica de testículo H3.1t (UniProt Q16695) comparten colas N-terminales altamente conservadas, donde ocurren modificaciones regulatorias clave.

La cola N-terminal de la histona H3 está sujeta a una diversa gama de modificaciones postraduccionales (PTM), incluyendo metilación, acetilación, fosforilación, citrulinación y otras. Estas modificaciones constituyen el 'código de histonas', que gobierna la estructura de la cromatina y la expresión génica. La metilación de la lisina 9 (K9; correspondiente a la posición 10 en el precursor completo) es una marca epigenética crítica. La H3K9 monometilada (H3K9me1) está asociada con el silenciamiento transcripcional y la formación de heterocromatina, y puede servir como sustrato para una mayor metilación por metiltransferasas específicas.

Este anticuerpo monoclonal de conejo se generó contra un péptido sintético monometilado alrededor de K9 de la histona H3.1 humana (P68431), permitiendo la detección específica de H3K9me1. No reconoce las formas no metiladas o metiladas de manera diferente (por ejemplo, H3K9me2/me3), como lo confirma el diseño del inmunógeno.

Localización subcelular: La histona H3 es predominantemente nuclear y asociada a cromosomas. Especificidad tisular: Las variantes canónicas de H3.1 se expresan en la mayoría de las células en división, mientras que la variante H3.1t (Q16695) se expresa específicamente en células testiculares.

Referencias relacionadas: PMID:11242053; PMID:16267050; PMID:17194708.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno es un péptido sintético monometilado alrededor de K9; la especificidad para H3K9me1 debe verificarse mediante ensayos de competición con péptidos con péptidos K9 no modificados, mono-, di- y trimetilados como controles negativo y positivo.
• En Western blot (WB) y dot blot (DB), se espera una banda/punto de aproximadamente 16 kDa. Asegure una extracción adecuada de histonas y una normalización de carga con un anticuerpo anti-H3 total.
• Para inmunohistoquímica (IHC-P) e inmunofluorescencia (IF/ICC), optimice las condiciones de recuperación antigénica y bloqueo para cada tipo de tejido/célula para obtener una tinción nuclear específica.
• La inmunoprecipitación de cromatina (ChIP) usando este anticuerpo puede mapear las distribuciones genómicas de H3K9me1; la reticulación y la cantidad de anticuerpo requieren optimización empírica. Considere ChIP secuencial para confirmar la especificidad de la monometilación.
• Se predice que el anticuerpo reacciona de forma cruzada con una amplia gama de especies debido a la alta conservación de secuencia del extremo N-terminal de H3; se recomienda la validación en el sistema de muestra relevante (por ejemplo, ratón, rata).
• En ELISA, el anticuerpo puede servir como reactivo de captura o detección para cuantificar H3K9me1 en histonas o nucleosomas extraídos.

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