Anticuerpo policlonal de conejo para Histona H3-R2 monometilada (Q16695/P68431) | WB, IF/ICC, ELISA

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de la Histona H3 (H3.1/H3.1t)

• La histona H3 es un componente central del nucleosoma, que envuelve y compacta el ADN en cromatina. Esto limita la accesibilidad del ADN y desempeña un papel central en la regulación de la transcripción, la reparación del ADN, la replicación del ADN y la estabilidad cromosómica. La accesibilidad del ADN se controla a través del "código de histonas": un conjunto complejo de modificaciones postraduccionales (MPT) y remodelación de nucleosomas.
• La proteína se localiza en el núcleo y los cromosomas.
• Son relevantes dos isoformas principales: H3.1 (codificada por múltiples genes, por ejemplo, H3C1, H3C2, etc., UniProt P68431) se expresa en la mayoría de las células somáticas, mientras que H3.1t (H3-4, HIST3H3, UniProt Q16695) es específico del testículo.
• La cola N-terminal de la histona H3 está sujeta a numerosas MPT, que incluyen acetilación, metilación, fosforilación, citrulinación y otras. Específicamente, la arginina 2 (R2) puede ser metilada. La dimetilación asimétrica en este sitio es catalizada por PRMT6 y está asociada a la regulación transcripcional. La monometilación en R2 es un paso intermedio y puede tener funciones distintas. Este anticuerpo reconoce específicamente la forma monometilada de R2. Referencias relacionadas: PMID:17898714, PMID:18077460, PMID:18079182

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es un péptido sintético monometilado alrededor de la R2 de la histona H3 humana. Al realizar una transferencia Western (WB), considere usar extractos nucleares o preparaciones enriquecidas en histonas para aumentar la señal. El peso molecular pronosticado es de ~15 kDa, pero las bandas pueden aparecer ligeramente más altas debido a las MPT o las interacciones proteicas.
• Para inmunofluorescencia/inmunocitoquímica (IF/ICC, puede ser necesario optimizar las condiciones de fijación y permeabilización. Dado que la histona H3 es nuclear, se recomienda la permeabilización con Tritón X-100 o metanol. Valide el patrón de tinción frente a marcadores nucleares conocidos.
• En ELISA, considere usar un péptido metilado como antígeno de recubrimiento para confirmar la especificidad por la R2 monometilada frente a las formas no modificadas o dimetiladas.
• Se pronostica una reactividad cruzada amplia entre especies (humano, ratón, rata y otras), pero es recomendable verificar la reactividad en el sistema de muestra específico de interés, especialmente para especies no mamíferas.
• Como anticuerpo policlonal de conejo, se debe evaluar la consistencia entre lotes para ensayos cuantitativos críticos. Incluir controles positivos y negativos apropiados (por ejemplo, competición con péptido monometilado) puede mejorar la fiabilidad de los datos.

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