pAb de conejo anti-MonoMetil-Histona H4-K20 (P62805) – Anticuerpo para investigación epigenética para WB, IHC, IF/ICC, ELISA

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de la histona H4

La histona H4 es un componente central del nucleosoma, la unidad básica de la cromatina. Junto con las histonas H2A, H2B y H3, forma un octámero alrededor del cual se enrolla el ADN, compactando el genoma dentro del núcleo. Este papel estructural es fundamental para todos los procesos basados en ADN, incluida la transcripción, la replicación, la reparación y la segregación cromosómica.

La histona H4 se localiza principalmente en el núcleo y está asociada con los cromosomas durante todo el ciclo celular. Durante la espermatogénesis, patrones de acetilación específicos pueden influir en su localización nuclear.

La función y las interacciones de la histona H4 están reguladas dinámicamente por una amplia gama de modificaciones postraduccionales (PTM), a menudo denominadas "código de histonas". Estas incluyen acetilación, metilación, fosforilación, citrulinación, ubiquitinación y diversas acilaciones en múltiples residuos. Dichas marcas alteran la estructura de la cromatina y reclutan proteínas efectoras para modular la expresión génica, la respuesta al daño del ADN y la remodelación de la cromatina.

Entre ellas, la metilación de la lisina 20 (H4K20) es una marca epigenética crítica. La monometilación de H4K20 (H4K20me1) está involucrada en la activación transcripcional, la progresión del ciclo celular y la respuesta al daño del ADN. El equilibrio entre los estados de mono-, di- y trimetilación en este sitio está estrictamente controlado por metiltransferasas y desmetilasas específicas.

Este anticuerpo se generó contra un péptido sintético correspondiente a la región que rodea la K20 de la histona H4 humana, portador de una modificación monometilada. Está diseñado para reconocer específicamente solo la forma monometilada de H4K20, lo que lo convierte en una herramienta valiosa para analizar los distintos resultados biológicos de los diferentes estados de metilación de H4K20.

Referencias relacionadas: UniProt P62805

Guía experimental y consejos técnicos

• Dado que la histona H4 está altamente conservada en los eucariotas, se prevé que este anticuerpo reaccione con muchas especies. Sin embargo, la reactividad cruzada debe verificarse empíricamente para sistemas que no sean humanos/ratón/rata.
• Para el western blot, enriquezca las proteínas de histonas o utilice métodos de extracción ácida para mejorar la detección de H4K20me1, ya que las histonas pueden quedar enmascaradas por proteínas no histónicas abundantes en los lisados celulares totales.
• En aplicaciones de dot blot (DB), incluya controles de péptidos tanto no modificados como monometilados para confirmar la especificidad de la modificación.
• Para la inmunohistoquímica (IHC), pueden ser necesarios pasos de recuperación de antígeno debido a la estrecha asociación de las histonas con el ADN en tejidos fijados en formalina.
• Cuando utilice inmunofluorescencia (IF/ICC), realice una tinción conjunta con un marcador nuclear para confirmar la localización nuclear esperada.
• Los protocolos de ELISA deben utilizar péptidos inmovilizados o extractos de histonas. Asegúrese de que el antígeno de recubrimiento presente el epítopo K20 monometilado para una detección óptima.
• Este anticuerpo es específico para la K20 monometilada y no detecta la K20 di- o trimetilada ni la H4 no modificada según el diseño del inmunógeno. Aun así, valide la especificidad en su sistema de muestra utilizando controles negativos apropiados (por ejemplo, líneas celulares con un estado de metilación de H4K20 alterado).

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