Ac pAb de conejo MonoMetil-Histona H4-K5 (P62805) para IF/ICC y ELISA

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de la histona H4

• Función: La histona H4 es un componente central del nucleosoma, que envuelve y compacta el ADN en cromatina. Esto limita la accesibilidad del ADN y desempeña un papel central en la regulación de la transcripción, la reparación del ADN, la replicación del ADN y la estabilidad cromosómica. Los nucleosomas constan de dos copias de cada una de las histonas H2A, H2B, H3 y H4, formando un octámero alrededor del cual se envuelven 147 pares de bases de ADN. El código de histonas, mediado por modificaciones postraduccionales, regula la accesibilidad del ADN y el remodelado de nucleosomas. Referencias relacionadas: UniProtKB P62805

• Localización subcelular: La histona H4 se localiza principalmente en el núcleo y se asocia con los cromosomas. La acetilación puede influir en su distribución subnuclear; por ejemplo, la H4 acetilada se localiza en el núcleo en espermátidas del paso 11. Referencias relacionadas: UniProtKB P62805

• Modificaciones postraduccionales: La histona H4 sufre extensas modificaciones postraduccionales, especialmente en su cola N-terminal. La acetilación se produce en múltiples lisinas (p. ej., K6, K9, K13, K17, K32, K92; ver PMID:19608861). La metilación se encuentra en la arginina 4 (dimetilación asimétrica por PRMT1; PMID:11387442) y la lisina 21 (monometilación; PMID:12086618). La monometilación en la lisina 5 (K5me1) es una marca epigenética específica reconocida por varias proteínas lectoras e implicada en la regulación transcripcional. Otras modificaciones incluyen la fosforilación, la citrulinación y la ubiquitinación, formando colectivamente un código regulatorio complejo. Referencias relacionadas: PMID:19608861, PMID:11387442, PMID:12086618

Guía experimental y consejos técnicos

• Diseño del inmunógeno: Este anticuerpo se generó contra un péptido sintético correspondiente a la región N-terminal de la histona H4 humana monometilada en K5. Al diseñar anticuerpos similares, asegúrese de que el péptido sea de alta pureza y de que la modificación se confirme mediante espectrometría de masas. Considere el uso de un péptido no metilado como control negativo en sus ensayos para verificar la especificidad.
• IF/ICC: Para inmunofluorescencia, la fijación estándar con paraformaldehído al 4% y la permeabilización con Triton X-100 al 0,1-0,5% suelen ser adecuadas. Bloquee la unión inespecífica con BSA al 5% o suero. La accesibilidad del epítopo puede variar; se podría considerar optimizar la recuperación de antígenos. Dado que las proteínas de histona son nucleares, espere una tinción nuclear. Incluya controles sin anticuerpo primario para evaluar el fondo.
• ELISA: Para el recubrimiento, diluya el anticuerpo o el antígeno en tampón de carbonato/bicarbonato (pH 9,6). Titule la concentración del anticuerpo para determinar la relación óptima señal/ruido. Utilice el péptido monometilado como control positivo y el péptido no modificado como control negativo para confirmar la especificidad.
• General: Como con cualquier anticuerpo específico de modificación, pueden producirse variaciones entre lotes; valide los nuevos lotes en su sistema experimental específico. Se predice reactividad cruzada para humano, ratón y rata basándose en la conservación de la secuencia; pruebe en su especie de interés.

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