pAb de conejo contra Histona H4 R3 monometilada (P62805) | Anticuerpo listo para IF/ICC y ELISA

Especificaciones y parámetros principales del producto

Contexto biológico: Función y localización de la Histona H4

La Histona H4 es una de las proteínas histonas centrales que, junto con H2A, H2B y H3, forman el nucleosoma: la unidad repetitiva fundamental de la cromatina. Cada nucleosoma consta de 147 pares de bases de ADN enrollados alrededor de un octámero que contiene dos copias de cada una de las cuatro histonas centrales. Esta estructura compacta el ADN genómico, pero también funciona como una plataforma dinámica para regular la accesibilidad del ADN. La Histona H4 cumple un papel central en la regulación de la transcripción, la reparación del ADN, la replicación del ADN y la estabilidad cromosómica. Estos procesos están estrictamente controlados por una amplia gama de modificaciones postraduccionales en las colas de las histonas, denominadas colectivamente el "código de histonas", que organizan la remodelación de nucleosomas y el reclutamiento de proteínas efectoras.

La Histona H4 se localiza predominantemente en el núcleo, donde se asocia a los cromosomas durante todo el ciclo celular. Durante la espermatogénesis, la H4 acetilada muestra patrones de localización nuclear específicos en los espermátides en alargamiento.

La cola N-terminal de la Histona H4 está sujeta a una gran variedad de modificaciones postraduccionales, que incluyen acetilación, metilación, fosforilación, citrulinación y muchas otras. La metilación de residuos de arginina es una marca reguladora clave. La monometilación en la arginina 3 (H4R3me1) es catalizada por protein arginin metiltransferasas y está implicada en la regulación transcripcional y el establecimiento de estados de cromatina.

Referencias relacionadas: PMID:11387442, PMID:11448779, PMID:15345777

Dado su alto grado de conservación entre especies, la secuencia y los patrones de modificación de la Histona H4 se preservan de forma generalizada desde levaduras hasta humanos, lo que sustenta la amplia reacción cruzada de este anticuerpo.

Guía experimental y consejos técnicos

• Dado que este anticuerpo se generó frente a un péptido sintético monometilado correspondiente a los residuos alrededor de R3 de la Histona H4 humana, se espera que reconozca específicamente la forma monometilada de H4R3. Los investigadores deben considerar validar la especificidad mediante ensayos de competición con péptidos o con líneas celulares tratadas con inhibidores de metiltransferasas.
• Para inmunofluorescencia (IF/ICC), la fijación estándar con paraformaldehído al 4% seguida de permeabilización con Tritón X-100 al 0,1–0,5% suele ser compatible con la detección de histonas. Se recomienda una contratinción nuclear (por ejemplo, DAPI) para confirmar la localización nuclear de la señal.
• En aplicaciones de ELISA, el anticuerpo se puede usar para detectar péptidos sintéticos de H4R3 monometilados o extractos de histonas de células. Se recomienda optimizar el buffer de recubrimiento y la dilución del anticuerpo para su sistema de ensayo específico.
• Se predice que el anticuerpo presenta reacción cruzada con la Histona H4 de humanos, ratones y ratas, así como con una amplia gama de otras especies debido a la alta conservación de la secuencia. Sin embargo, la reacción cruzada debe validarse experimentalmente en el sistema de muestra correspondiente.

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