Anticuerpo policlonal de conejo para MonoMetil-Histona H4-R3 | P62805 | WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de la histona H4

La histona H4 es un componente central del nucleosoma, alrededor del cual se enrollan aproximadamente 147 pares de bases de ADN genómico. Como parte del octámero de histonas, cumple funciones esenciales en la regulación de la transcripción, la replicación del ADN, la reparación y la estabilidad cromosómica. La modificación postraduccional dinámica de las histonas, denominada colectivamente el "código de histonas", gobierna la estructura de la cromatina y la expresión génica. Referencias relacionadas: UniProt P62805

La histona H4 se localiza predominantemente en el núcleo y se asocia a los cromosomas a lo largo de todo el ciclo celular. La H4 acetilada se ha observado específicamente en el núcleo de espermátidas de etapa 11, lo que indica su papel en la compactación de la cromatina durante la espermatogénesis. Referencias relacionadas: UniProt P62805

La cola N-terminal de la histona H4 está sujeta a extensas modificaciones postraduccionales, que incluyen acetilación, metilación, fosforilación, citrulinación y diversos eventos de acilación. La arginina 3 (R3; que corresponde a R4 en la proteína procesada después de la eliminación de la metionina iniciadora) es un residuo clave que puede ser monometilado, dimetilado asimétricamente (por PRMT1), dimetilado simétricamente (por PRMT5/PRMT7) o convertido en citrulina. El presente anticuerpo reconoce específicamente la forma monometilada de la histona H4 en la arginina 3. Referencias relacionadas: PMID:11387442, PMID:11448779, PMID:15345777, PMID:16567635

Guía experimental y consejos técnicos

• Diseño del inmunógeno: El anticuerpo se generó contra un péptido sintético monometilado correspondiente a la arginina 3 de la histona H4 humana (NP_003529.1). Al evaluar la especificidad, considere los ensayos de competición con péptidos o los dot blots con péptidos modificados diferencialmente para confirmar el reconocimiento selectivo de la monometilación sobre la arginina 3 no modificada o dimetilada.
• Western blotting (WB): La histona H4 tiene un peso molecular predicho de ~11 kDa; se recomiendan geles de SDS-PAGE de alto porcentaje (15% o de gradiente) para una resolución óptima. Los extractos nucleares o las histonas extraídas con ácido suelen generar señales más fuertes. Debido al pequeño tamaño, verifique la eficiencia de transferencia y utilice membranas adecuadas (por ejemplo, PVDF de 0,2 µm).
• Inmunohistoquímica (IHC-P) e inmunocitoquímica/inmunofluorescencia (IF/ICC): Se espera un patrón de tinción predominantemente nuclear. Se debe optimizar la recuperación de antígeno (por ejemplo, tampón de citrato, pH 6,0) para secciones embebidas en parafina y la permeabilización con detergente para células. La reactividad cruzada del anticuerpo a tejidos de ratón y rata lo hace adecuado para el estudio de modificaciones de histonas en diversos sistemas modelo.
• ELISA: El péptido monometilado se puede usar como antígeno de recubrimiento para ELISA directo o competitivo para cuantificar la afinidad de unión y la especificidad del anticuerpo. Los factores de dilución deben titularse en función del formato de ensayo.
• Reactividad cruzada entre especies: Se informa que el anticuerpo reconoce la histona H4 de humano, ratón y rata, y se predice un amplio rango de otras especies debido a la extrema conservación de la secuencia de la histona H4. Para especies no evaluadas, verifique la homología de la secuencia peptídica en la región del inmunógeno.
• Consideraciones para anticuerpos policlonales: Como anticuerpo policlonal de conejo, puede haber variabilidad entre lotes en el título y el fondo. Incluya controles positivos y negativos adecuados y re-valide cada nuevo lote en sus condiciones experimentales.

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