NFKB1 Rabbit pAb para WB, IF/ICC, ELISA - P19838

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de NFKB1

• NFKB1 codifica la proteína precursora p105 y su subunidad p50 procesada proteolíticamente (Factor nuclear NF-kappa-B p50). Mientras que p105 funciona como un inhibidor tipo IκB que retiene a los dímeros NF-κB en el citoplasma, la generación de p50 permite la unión al ADN y la regulación transcripcional. Referencias relacionadas: PMID:1423592
• La subunidad p50 activa se asocia con RELA/p65 para formar el heterodímero p65-p50, un potente activador transcripcional que se une a la secuencia consenso κB 5'-GGRNNYYCC-3' en los potenciadores de los genes diana. Referencias relacionadas: PMID:1740106, PMID:7830764
• Los complejos NF-κB suelen secuestrarse en el citoplasma por inhibidores IκB. La activación canónica implica la fosforilación mediada por el cinasa IκB (IKK) y la posterior degradación proteasómica de IκB, liberando NF-κB para que se transloque al núcleo.
• NF-κB es un factor de transcripción pleiotrópico presente en casi todos los tipos de células y actúa como mediador central de las respuestas inmunitarias e inflamatorias, así como de la supervivencia celular, la proliferación y la apoptosis.
• El homodímero p50-p50 funciona como un represor transcripcional a menos que se asocie con BCL3, que lo convierte en un activador. Por tanto, la composición del dímero determina la expresión del gen diana.
• NFKB1 se localiza predominantemente en el citoplasma en las células en reposo, pero se transloca al núcleo tras la activación, lo cual es coherente con su función como factor sensible a las señales.
• Amplias modificaciones postraduccionales —incluyendo fosforilación, acetilación y ubiquitinación— ajustan finamente la estabilidad de NFKB1, su actividad de unión al ADN y su salida transcripcional.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno (aminoácidos 41–365) se encuentra dentro del dominio de homología Rel N-terminal conservado entre p105 y p50. En la transferencia Western (Western blotting), pueden aparecer tanto la banda de p105 de longitud completa (~105 kDa) como la banda de p50 procesada (~50 kDa); confirme la identidad de la banda usando extractos celulares y tratamientos apropiados.
• Para inmunofluorescencia/ICC, NFKB1 es predominantemente citoplasmático en condiciones basales; la estimulación con TNF-α o IL-1β puede inducir una rápida translocación nuclear. Incluya controles no tratados para visualizar la redistribución subcelular.
• Al realizar ELISA, considere el uso de proteína recombinante NFKB1 (p50) y anticuerpos de detección emparejados para validar la especificidad y la sensibilidad. Optimice las condiciones de recubrimiento y bloqueo para su formato de ensayo.
• Como anticuerpo policlonal, se debe verificar la consistencia entre lotes con un control positivo estándar de lisado o proteína recombinante.

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