NLRP3 mAb de conejo - Q8R4B8

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de NLRP3

• NLRP3, también conocido como criopirina, es un miembro de la familia NLRP (que contiene dominios NACHT, LRR y PYD) de sensores intracelulares que se ensambla para formar el inflamasoma NLRP3. Otros nombres alternativos son NALP3, CIAS1, Pypaf1, Mmig1, entre otros.
• Como componente sensor, NLRP3 detecta una amplia gama de señales asociadas a patógenos y daños (por ejemplo, ATP, nigericina, cristales, β-amiloide), desencadenando la formación del inflamasoma. Esto conduce a la activación de la caspasa-1, que corta pro-IL-1β y pro-IL-18 en sus formas activas e induce la piroptosis a través de gasdermina-D. Referencias relacionadas: PMID:19362020, PMID:23582325, PMID:26642356
• La activación requiere salida de K⁺ y a menudo implica la relocalización a la red trans-Golgi o sitios de contacto entre mitocondrias y retículo endoplásmico. La actividad ATPasa de NLRP3 es necesaria para el ensamblaje del inflamasoma. Referencias relacionadas: PMID:34861190
• NLRP3 también funciona de forma independiente como factor de transcripción que promueve la diferenciación Th2 al unirse al promotor de IL-4 y regular la expresión de citocinas Th2, influyendo así en el asma alérgica y el crecimiento tumoral. Referencias relacionadas: PMID:26098997
• La localización subcelular es dinámica: en condiciones de reposo, NLRP3 reside en el citosol y el retículo endoplásmico; tras la activación, se traslada al centro organizador de microtúbulos, el Golgi y es secretado. También se puede encontrar en el núcleo.
• Alta expresión en leucocitos de sangre periférica, incluidos macrófagos y linfocitos Th2, lo que coincide con su papel en la inmunidad innata y adaptativa. Referencias relacionadas: PMID:15302403, PMID:26098997
• Las modificaciones postraduccionales incluyen fosforilación, palmitoilación y ubiquitinación, que regulan su actividad y estabilidad. Palabras clave: Activador, Unión a ATP, Inflamasoma, Repetición rica en leucina, Proteoma de referencia, Conjugación Ubl.

Orientación experimental y consejos técnicos

• Este anticuerpo se obtuvo contra los aminoácidos 1–150 de NLRP3 de ratón, lo que sugiere que reconoce el dominio PYD N-terminal. Puede detectar tanto las formas de longitud completa como las cortadas.
• Para Western blotting (proteína de 118 kDa), use un gel de SDS-PAGE al 6–8% y una transferencia prolongada (por ejemplo, 2 horas a 100 V) para proteínas de alto peso molecular. Incluya un lisado de control positivo de macrófagos de ratón o células THP-1 tratadas con LPS y nigericina.
• Para inmunofluorescencia, permeabilice las células con 0,1% de Triton X-100 para acceder a NLRP3 citosólico y asociado a orgánulos. Realice una tinción simultánea con marcadores de orgánulos para estudiar la translocación dependiente de la activación.
• En inmunoprecipitación, utilice 1–2 µg de anticuerpo por 500 µg de lisado; la proteína puede requerir reticulación o una lisis cuidadosa para mantener los complejos del inflamasoma.
• Valide todas las aplicaciones con sistemas de tejidos o células de ratón adecuados, ya que solo se informa reactividad cruzada para ratón.

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