Anticuerpo policlonal de conejo anti-NLRP3 para WB, IF/ICC, ELISA - Q8R4B8

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de NLRP3

• NLRP3 (proteína 3 que contiene los dominios NACHT, LRR y PYD, también conocida como criopirina) es un sensor intracelular que forma el componente central del inflamasoma NLRP3, el cual media la activación en respuesta a defectos en la integridad de la membrana, lo que conduce a la secreción de IL1B e IL18 y a la piroptosis. Referencias relacionadas: PMID:19362020, PMID:23582325, PMID:26642356

• NLRP3 inicia la formación de un complejo de inflamasoma polimérico con CASP1 y PYCARD/ASC, que activa la caspasa-1 para escindir pro-IL1B, pro-IL18 y gasdermina-D (GSDMD), dando lugar a la liberación de citocinas y a la muerte celular piroptótica. Referencias relacionadas: PMID:16407889, PMID:18403674, PMID:19362020, PMID:16546100, PMID:17008311, PMID:26642356

• Diversos estímulos asociados a patógenos y daños, incluidos el ATP extracelular, la nigericina, los cristales (de urato y colesterol), el beta-amiloide y las partículas (de asbesto y sílice), desencadenan la activación de NLRP3, convergiendo casi todos en la salida de K+ intracelular. Referencias relacionadas: PMID:16407888, PMID:16407889, PMID:16407890, PMID:23809161

• La activación del inflamasoma NLRP3 también es necesaria para la secreción de HMGB1 y regula una respuesta homeostática de cicatrización de heridas que dirige la migración de neutrófilos hacia los sitios necróticos sin dañar el tejido sano. Referencias relacionadas: PMID:22801494, PMID:20947763

• Tras su activación, NLRP3 es transportado al centro organizador de microtúbulos (MTOC) y posteriormente a vesículas dispersas de la red trans-Golgi (dTGN), donde se une al fosfatidilinositol 4-fosfato (PtdIns4P) y ensambla inflamasomas activos, un proceso desbloqueado por NEK7. Referencias relacionadas: PMID:26814970, PMID:34615873, PMID:34861190, PMID:30487600

• NLRP3 se expresa en gran medida en los leucocitos de sangre periférica (linfocitos Th2 y macrófagos) y en niveles bajos en los osteoblastos, en consonancia con sus funciones inmunológicas e inflamatorias. Referencias relacionadas: PMID:15302403, PMID:16546100, PMID:26098997, PMID:28847925, PMID:17907925

• Independientemente de su función como andamiaje del inflamasoma, NLRP3 actúa como regulador transcripcional en las células Th2, uniéndose al ADN y modulando la expresión de IL4, IL5, IL13 y otros genes esenciales para la diferenciación Th2 y la inflamación alérgica. Referencias relacionadas: PMID:26098997

• NLRP3 posee actividad ATPasa intrínseca y está regulado por diversas modificaciones postraduccionales, incluidas la fosforilación, la palmitoilación y la ubiquitinación, que controlan su umbral de activación y sus interacciones. Referencias relacionadas: PMID:34861190

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno abarca los aminoácidos 1–93 de NLRP3 de ratón, una región que contiene el dominio pirina (PYD). Tenga en cuenta que el anticuerpo puede detectar tanto la proteína de longitud completa como los fragmentos que contienen PYD; valide la especificidad en su sistema modelo.
• Para la transferencia Western, el peso molecular previsto es de aproximadamente 118 kDa; sin embargo, las modificaciones postraduccionales pueden producir bandas adicionales. Utilice controles positivos y negativos adecuados (por ejemplo, lisados de macrófagos estimulados con LPS+ATP) y optimice los porcentajes de gel para proteínas de alto peso molecular.
• En inmunofluorescencia/inmunocitoquímica (IF/ICC), NLRP3 puede mostrar una tinción punteada o difusa según su estado de activación. Las condiciones de fijación y permeabilización deben optimizarse para preservar su localización nativa.
• Para aplicaciones de ELISA, puede ser necesario combinarlo con otro anticuerpo específico de NLRP3 para formatos tipo sándwich; su naturaleza policlonal puede ser ventajosa para la captura o la detección.

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