mAb de conejo Pan-Akt para Western Blot, IP, IF, IHC-P, ELISA - P31749 / P31751 / Q9Y243

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de Pan-Akt

• AKT1 es una de las tres serina/treonina quinasas estrechamente relacionadas (AKT1/PKBα, AKT2/PKBβ, AKT3/PKBγ) que comparten una alta similitud estructural y especificidades de sustrato superpuestas, regulando colectivamente procesos celulares críticos.
  Referencias relacionadas: PMID:11882383 PMID:15526160 PMID:15861136
• Actuando como elemento posterior a PI3K, AKT media la señalización de insulina y factores de crecimiento (IGF1, EGF, PDGF) para controlar el metabolismo, el crecimiento celular, la proliferación, la supervivencia y la angiogénesis.
  Referencias relacionadas: PMID:12176338 PMID:12964941 PMID:11882383 PMID:15526160 PMID:15861136
• AKT promueve la supervivencia celular al fosforilar directamente e inactivar factores proapoptóticos, incluyendo MAP3K5/ASK1 (Ser83) y BAD, y al activar factores de transcripción como CREB1 y NF-κB.
  Referencias relacionadas: PMID:11154276 PMID:10926925 PMID:9829964
• Mediante la fosforilación de TSC2 y DEPDC5/CASTOR1, AKT estimula la actividad de mTORC1, promoviendo la síntesis de proteínas e inhibiendo la autofagia.
  Referencias relacionadas: PMID:12150915 PMID:12172553 PMID:31548394 PMID:33594058
• AKT fosforila a FOXO1, FOXO3 y FOXO4, desencadenando su unión a proteínas 14-3-3 y su retención citoplasmática, suprimiendo así la transcripción de genes proapoptóticos.
  Referencias relacionadas: PMID:10358075
• La proteína se localiza en el citoplasma, núcleo, membrana celular y espacio intermembranal mitocondrial, lo que facilita la señalización dependiente del contexto; se expresa de forma ubicua y con frecuencia está sobreactivada en cánceres como el carcinoma de próstata y de mama.

Guía experimental y consejos técnicos

• El peso molecular esperado para Pan-Akt es de aproximadamente 56 kDa; se puede observar una banda única o múltiples bandas correspondientes a diferentes isoformas, dependiendo de la línea celular y las condiciones de tratamiento.
• Para Western blotting (WB), se recomienda comenzar con una dilución 1:1000 y optimizarla en función de la abundancia del objetivo en su muestra.
• Para inmunoprecipitación (IP), utilice 2-5 µg de anticuerpo por 500 µg de lisado de proteína total total; valide el resultado con los controles positivos y negativos apropiados.
• En inmunofluorescencia (IF/ICC) e inmunohistoquímica (IHC-P), optimice la fijación y permeabilización, y pruebe diluciones entre 1:50 y 1:200.
• Las aplicaciones de ELISA pueden requerir el emparejamiento con un anticuerpo de detección adecuado; asegúrese de que el anticuerpo reconozca la proteína nativa en las condiciones del ensayo.
• Se ha descrito reactividad cruzada para Akt de humano, ratón y rata; si utiliza otras especies, verifique la homología de secuencia en la región del inmunógeno (residuos 1-123 de Akt1 humano).
• El anticuerpo reconoce las tres isoformas de AKT; para estudios específicos de isoformas, confirme la especificidad con controles genéticos o inhibidores específicos.

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