Anticuerpo policlonal de conejo anti-PDK4 para WB, IHC-P, IF/ICC y ELISA - Q16654

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de PDK4

• PDK4 es una quinasa mitocondrial que fosforila específicamente las subunidades alfa E1 de la piruvato deshidrogenasa (PDHA1 y PDHA2), lo que provoca la inactivación del complejo PDH.
• Mediante la regulación de PDH, PDK4 controla el flujo de piruvato hacia el ciclo del ácido tricarboxílico, regulando negativamente la respiración aeróbica y promoviendo la utilización de ácidos grasos en lugar de la oxidación de la glucosa.
• PDK4 es esencial para la adaptación metabólica durante el ayuno y la inanición: ayuda a mantener la homeostasis de la glucosa en sangre, evita la formación excesiva de cuerpos cetónicos y preserva el pH sanguíneo normal en condiciones de privación de nutrientes.
• La proteína se localiza en la matriz mitocondrial mediante un péptido de tránsito N-terminal y funciona como una quinasa nucleotídica de unión a ATP.
• Aunque se expresa de forma ubicua, PDK4 presenta sus niveles más altos en el corazón y el músculo esquelético, lo que refleja su importancia en tejidos con una elevada demanda metabólica y flexibilidad en el uso de combustibles.
• Además del control metabólico, PDK4 contribuye a la generación de especies reactivas de oxígeno, protege a las células epiteliales desprendidas de la anoikis e influye en la proliferación celular mediante la modulación del metabolismo de carbohidratos y lípidos.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno abarca una gran región interna (aa 102–411) de PDK4 humano; el anticuerpo policlonal resultante puede reconocer múltiples epítopos, lo que potencialmente aumenta la sensibilidad, pero también requiere controles negativos adecuados.
• Para western blot (WB), se espera una banda principal de aproximadamente 46 kDa; valide la especificidad utilizando lisados de tejidos o células con expresión conocida de PDK4 (por ejemplo, corazón y músculo esquelético) o mediante silenciamiento con siRNA.
• En inmunohistoquímica (IHC-P), considere los métodos de recuperación antigénica y pruebe el anticuerpo en cortes fijados con formalina e incluidos en parafina procedentes de corazón o músculo esquelético; debería observarse tinción mitocondrial.
• Para inmunofluorescencia (IF/ICC), confirme la localización mitocondrial mediante tinción conjunta con un marcador mitocondrial; puede ser necesario optimizar las condiciones de fijación y permeabilización.
• Se ha informado de reactividad cruzada con muestras humanas, de ratón y de rata; la alineación de secuencias sugiere la existencia de epítopos conservados, pero los usuarios deben verificar el rendimiento en sus sistemas modelo específicos.

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