PE Anticuerpo monoclonal de conejo anti-Humano/Ratón Fosfo-Zap70-Y319+Syk-Y352 para citometría de flujo intracelular - P43403

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de ZAP70

• ZAP70 es una tirosina quinasa de 70 kDa esencial para la inmunidad adaptativa, desempeñando un papel central en la señalización del receptor de células T (TCR) al fosforilar las proteínas adaptadoras LAT y LCP2 tras la activación.
• Tras la interacción del TCR, ZAP70 se recluta hacia los motivos ITAM fosforilados de CD3E y CD247/CD3Z en la membrana plasmática, un proceso que alivia su autoinhibición y requiere la fosforilación mediada por LCK (PubMed:7509083).
  Referencias relacionadas: PMID:7509083
• ZAP70 regula además la dinámica de activación de las células T al controlar la reorganización del citoesqueleto, la adhesión y la movilidad, asegurando una entrega adecuada de efectores a las células presentadoras de antígenos.
• También participa en la regulación negativa del TCR al mediar la internalización y degradación de CD247/CD3Z a través de la interacción con la ligasa de ubiquitina CBL y los adaptadores SLA/SLA2, modulando así la terminación de la señal.
• ZAP70 se expresa en células T, células asesinas naturales, timocitos tempranos y células B pro/pre, y contribuye al desarrollo y activación tanto de células T como de células B.
• La proteína contiene dos dominios SH2 que se unen específicamente a ITAM fosforilados, un dominio quinasa de unión a ATP y sufre modificaciones postraduccionales que incluyen fosforilación, acetilación y ubiquitinación, como destacan las palabras clave de UniProt como "Fosfoproteína", "Conjugación Ubl", "Enlace isopeptídico" y "Acetilación".li>
• El empalme alternativo produce múltiples isoformas de ZAP70, y las variantes asociadas a enfermedades están relacionadas con la inmunodeficiencia combinada grave (SCID) debido a una señalización del TCR deteriorada.
• El sitio del inmunógeno (Y319) es un sitio clave de fosforilación regulatoria en la región interdominio B, altamente conservado entre humano y ratón, y su fosforilación es crítica para la activación de ZAP70; el anticuerpo también puede reaccionar de forma cruzada con Syk en su Y352 análogo debido a la homología de secuencia en el bucle de activación.

Guía experimental y consejos técnicos

• Debido a la naturaleza específica para fosfo de este anticuerpo, incluya inhibidores de fosfatasas en todos los tampones de lisis, fijación y tinción para mantener los niveles de fosforilación durante el procesamiento de la muestra.
• Valide la especificidad del anticuerpo comparando las señales en células estimuladas frente a no estimuladas, o tratando las muestras con fosfatasa lambda antes de la tinción.
• El anticuerpo está validado para citometría de flujo intracelular (FC intra); asegure protocolos optimizados de fijación y permeabilización (por ejemplo, usando permeabilización basada en metanol o saponina) para obtener los mejores resultados.
• Para estudios de señalización en células T, considere usar controles positivos conocidos como células Jurkat estimuladas con anti-CD3/CD28 o PBMCs humanos primarios, y controles negativos como células T en reposo o células B deficientes en Syk si se evalúa la reactividad cruzada.

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