Anticuerpo monoclonal de conejo anti-IFN-gamma humano conjugado con PE/Cyanine7 para citometría de flujo intracelular - P01579

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización del interferón gamma

• El interferón gamma (IFN-γ) es un interferón de tipo II secretado predominantemente por linfocitos T activados y células asesinas naturales (NK), que actúa como una citoquina pleiotrópica clave en la regulación inmunitaria.
• Ejerce respuestas antimicrobianas, antivirales y antitumorales cruciales mediante la activación de células inmunitarias efectoras y la mejora de la presentación de antígenos.
  Referencias relacionadas:
  PMID:16914093
  PMID:8666937
• Tras unirse a su receptor IFNGR1, el IFN-γ desencadena la cascada de señalización JAK-STAT, lo que conduce a la activación de STAT1, la translocación nuclear y la transcripción de genes regulados por IFN-γ, incluidos factores de transcripción como IRF1.
  Referencias relacionadas:
  PMID:8349687
  PMID:16914093
• El IFN-γ mejora la presentación de antígenos del MHC de clase I al inducir el reemplazo de las subunidades constituyentes del proteasoma por subunidades del inmunoproteasoma, y al regular al alza el activador PA28, aumentando así la cantidad, calidad y repertorio de péptidos para la carga en el MHC de clase I.
  Referencias relacionadas:
  PMID:8666937
  PMID:8163024
  PMID:11112687
• También regula al alza los complejos MHC de clase II en la superficie celular al promover la expresión de moléculas clave como las catepsinas B, H y L, optimizando aún más la presentación de antígenos.
  Referencias relacionadas:
  PMID:7729559
• Participa en la regulación del desarrollo, quiescencia y diferenciación de las células madre hematopoyéticas en condiciones homeostáticas. (Por similitud)
• El IFN-γ es una glicoproteína secretada con una masa molecular calculada de aproximadamente 19.3 kDa; se caracteriza por un péptido señal, glicosilación y un sitio de escisión en un par de residuos básicos (palabras clave de UniProt).

Guía experimental y consejos técnicos

• Para la citometría de flujo intracelular, establezca condiciones adecuadas de fijación y permeabilización celular para permitir la detección de IFN-γ en células T o NK activadas; los estimulantes comunes incluyen PMA/ionomicina en presencia de un inhibidor del transporte de proteínas.
• El inmunógeno (aa 24–166) corresponde a la forma secretada madura del IFN-γ humano; por lo tanto, se espera que el anticuerpo reconozca la citoquina acumulada intracelularmente, lo que lo hace adecuado para ensayos funcionales de citoquinas.
• Incluya controles de compensación adecuados cuando utilice el conjugado PE/Cyanine7 en paneles multicolor, y considere el uso de un canal de descarte (dump channel) o un tinte de viabilidad para excluir células muertas.
• Valide la especificidad de la tinción en muestras de control positivo y negativo relevantes, como células mononucleares de sangre periférica humana estimuladas frente a no estimuladas, para confirmar la detección de IFN-γ endógeno.

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