Anticuerpo Monoclonal de Conejo anti-Humano/Mono CD8a con PE/Cianina7 para Citometría de Flujo - P01732

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de CD8a

• CD8A codifica la cadena alfa de la glucoproteína de superficie de células T CD8, un correceptor crítico en la inmunidad adaptativa. Existe como un heterodímero alfa/beta unido por enlaces disulfuro o como un homodímero alfa/alfa.
• La cadena alfa de CD8 funciona como un correceptor para las moléculas de clase I del MHC, interactuando simultáneamente con el receptor de células T (TCR) y el MHC I en las células presentadoras de antígenos. Esto recluta a la cinasa Src LCK, desencadenando vías de señalización descendentes que conducen a la activación de linfocitos T citotóxicos, la producción de citoquinas y la muerte de células diana.
• En las células asesinas naturales (NK), los homodímeros de CD8A proporcionan un mecanismo de supervivencia y facilitan la conjugación y lisis de múltiples células diana. También promueven la supervivencia y diferenciación de los linfocitos activados en células T de memoria CD8.
• La localización subcelular es principalmente en la membrana celular como una proteína de membrana de tipo I de un solo paso. También se produce una forma soluble secretada mediante splicing alternativo.
• Especificidad de tejido: En las células T derivadas del timo, CD8 típicamente consiste en un heterodímero alfa/beta. Los homodímeros de CD8A se encuentran en subconjuntos de células NK, células T de memoria, linfocitos intraepiteliales, monocitos y células dendríticas. La expresión se regulan al alza en las células dendríticas plasmacitoides tras la estimulación viral.
• Las modificaciones postraduccionales incluyen la glicosilación, que explica el peso molecular mayor al previsto observado (sin modificar ~26 kDa; formas maduras a 21, 25 y 30 kDa), y la palmitoilación, que ancla la proteína a los balsas de lípidos.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno utilizado para generar este anticuerpo es una proteína recombinante correspondiente a los aminoácidos 22-182, que abarca el dominio extracelular de CD8A. Esta región es crucial para la interacción con el MHC I y está expuesta en la superficie celular, lo que la convierte en un objetivo ideal para aplicaciones de citometría de flujo.
• Para la citometría de flujo (FC), titule el anticuerpo para determinar la concentración óptima para su muestra específica. Incluya anticuerpos de control de isotipo apropiados conjugados con el mismo fluoróforo (PE/Cianina7) para evaluar la unión no específica.
• Dado que PE/Cianina7 es un tinte en tándem, evite la exposición prolongada a la luz y a los fijadores que pueden degradar el tinte. Considere el uso de un control de compensación al realizar paneles multicolores para corregir la superposición espectral.
• Valide el rendimiento del anticuerpo utilizando poblaciones celulares positivas y negativas conocidas: por ejemplo, células T de sangre periférica humana (CD8+ positivas) frente a células B (negativas) o líneas celulares apropiadas.
• Si detecta CD8A intracelular (p. ej., en células T activadas o residentes en tejidos), optimice las condiciones de fijación y permeabilización que preserven el epítopo y el fluoróforo.

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