Fosfo-AKT1-T308+AKT2-T309+AKT3-T305 Conejo pAb - P31749 / P31751 / Q9Y243

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de AKT1 (Proteína quinasa serina/treonina RAC-alfa)

• AKT1 (PKBα, RAC-PK-alfa) es una quinasa serina/treonina expresada de forma ubicua que, junto con AKT2 y AKT3, forma la familia de quinasas AKT central en la señalización de PI3K, regulando el metabolismo, la proliferación, la supervivencia, el crecimiento y la angiogénesis. Referencias relacionadas: PMID:11882383 PMID:15526160 PMID:15861136
• A través de la fosforilación de numerosos sustratos, AKT1 media la captación de glucosa inducida por insulina (TBC1D4) y la síntesis de glucógeno (GSK3A/GSK3B). Referencias relacionadas: PMID:11994271
• Promueve la supervivencia celular al fosforilar MAP3K5/ASK1 en Ser-83, inhibiendo la apoptosis, e impulsa la señalización de mTORC1 a través de la fosforilación de TSC2 y DEPDC5. Referencias relacionadas: PMID:11154276 PMID:12150915 PMID:12172553 PMID:31548394 PMID:33594058
• AKT1 regula los factores de transcripción FOXO1/3/4 y CREB1, influyendo en la expresión de genes pro-supervivencia y en la transcripción dependiente de NF-κB. Referencias relacionadas: PMID:10358075 PMID:9829964
• Subcelularmente, AKT1 se desplaza entre el citoplasma, el núcleo, la membrana celular y las mitocondrias, donde modula la captación de calcio mitocondrial y otras funciones específicas de orgánulos.
• Las fosforilaciones activadoras clave ocurren en Thr-308 (o el equivalente Thr-309 en AKT2, Thr-305 en AKT3) en el bucle de activación y Ser-473 en el motivo hidrofóbico, desencadenadas por la estimulación de factores de crecimiento.
• AKT1 está frecuentemente desregulado en cánceres (próstata, mama) y actúa como un proto-oncogén, con niveles elevados de fosforilación que se correlacionan con la progresión de la enfermedad.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• Utilice inhibidores de fosfatasas durante la preparación de la muestra para preservar la señal de fosforilación; valide la fosfo-especificidad comparando con anticuerpos de AKT total o mediante tratamiento con fosfatasa.
• El inmunógeno es un fosfopéptido sintético alrededor de Thr-308 de AKT1 humano; se espera que el anticuerpo detecte AKT1, AKT2 y AKT3 fosforilados en sitios equivalentes cuando se pruebe en las especies apropiadas.
• Para Western blot, espere múltiples bandas correspondientes a las diversas isoformas de AKT (~48-55 kDa); confirme la identidad de la banda con controles específicos de isoforma o siRNA si es necesario.
• Para ELISA, considere una configuración de anticuerpos emparejados fosfo-específico/AKT total para normalizar la carga de proteína.
• Optimice la dilución del anticuerpo primario para su tipo de muestra específico; las diluciones iniciales sugeridas para WB suelen ser de 1:500 a 1:2000, pero deben determinarse empíricamente.

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