mAb de conejo anti-Fosfo-AKT1-T450 + AKT2-T451 + AKT3-T447 para WB, IHC-P, ELISA - P31749 / P31751 / Q9Y243

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de la familia AKT

• La familia AKT está compuesta por tres serina/treonina quinasas proteicas muy relacionadas: AKT1 (PKB alfa, P31749), AKT2 (PKB beta, P31751) y AKT3 (PKB gamma, Q9Y243), codificadas por los genes AKT1, AKT2 y AKT3, respectivamente. Comparten una alta homología de secuencia y tienen roles biológicos superpuestos pero distintos.
• Las quinasas AKT regulan diversos procesos celulares, entre ellos el metabolismo, la proliferación, la supervivencia celular, el crecimiento y la angiogénesis, al fosforilar una amplia gama de sustratos posteriores (más de 100 registrados).
  Referencias relacionadas: PMID:11882383, PMID:15526160, PMID:15861136
• Tras la activación por factores de crecimiento y la señalización de PI3K, AKT media la captación de glucosa inducida por insulina a través de la translocación de SLC2A4/GLUT4, promueve la síntesis de glucógeno al inhibir GSK3 y estimula la síntesis de proteínas mediante la activación de la vía mTORC1.
  Referencias relacionadas: PMID:11994271, PMID:12150915, PMID:12172553
• AKT promueve la supervivencia celular al fosforilar e inactivar factores proapoptóticos como MAP3K5/ASK1 y BAD, y al activar factores de transcripción como CREB1 que impulsan la expresión de genes antiapoptóticos.
  Referencias relacionadas: PMID:11154276, PMID:9829964, PMID:10926925
• Su localización subcelular incluye citoplasma, núcleo, membrana celular y espacio intermembranal mitocondrial, lo que refleja sus amplias funciones de señalización en respuestas celulares compartimentadas.
• Las modificaciones postraduccionales, en particular la fosforilación, son críticas para la actividad de AKT; dos residuos clave (Thr-308 y Ser-473 en AKT1) son esenciales para una activación completa, mientras que la fosforilación en el motivo de giro (Thr-450 en AKT1, equivalente a Thr-451 en AKT2 y Thr-447 en AKT3) puede influir en la estabilidad de la quinasa y las interacciones proteicas.
• AKT1 se expresa de forma ubicua, y su expresión y fosforilación alteradas están relacionadas con estados patológicos como el cáncer; con frecuencia se observan niveles elevados de AKT fosforilada en cánceres de mama y próstata.
• Las palabras clave asociadas a AKT1 (UniProt P31749) son apoptosis, metabolismo de hidratos de carbono, membrana celular, citoplasma, quinasa, núcleo, fosfoproteína, protooncogén, serina/treonina proteína quinasa y regulación de la traducción.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es un péptido sintético fosforilado que abarca la región de Thr-450 de AKT1 humano; se espera que el anticuerpo reconozca AKT1, AKT2 y AKT3 cuando se encuentran fosforilados en sus respectivos sitios equivalentes (T450/T451/T447).
• Para Western blot, prepare los lisados con inhibidores de fosfatasas para preservar la fosforilación; se esperan bandas de aproximadamente 48–55 kDa dependiendo de la isoforma. Incluya controles positivos adecuados (por ejemplo, células estimuladas con factor de crecimiento) y controles negativos (muestras no tratadas o tratadas con fosfatasa).
• Considere el uso de muestras tratadas con fosfatasa o un control de bloqueo con péptido no fosforilado para confirmar la fosfoespecificidad de la señal.
• En inmunohistoquímica (IHC-P), optimice las condiciones de recuperación de antígeno e incluya controles de tejido positivos y negativos para validar la tinción; las señales fosfoespecíficas pueden ser sensibles a la fijación y el procesamiento.
• Para ELISA, combine con reactivos de captura/detección adecuados y valide el ensayo usando concentraciones conocidas de péptido fosforilado o lisados celulares.

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