mAb de conejo anti Phospho-AMPKα1-T183+AMPKα2-T172 - Q13131 / P54646

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de AMPKα

• AMPKα1 (PRKAA1) y AMPKα2 (PRKAA2) son dos isoformas de la subunidad alfa catalítica del complejo heterotrimérico AMPK, que también contiene subunidades reguladoras beta y gamma.
• Subunidad catalítica de AMPK, una proteína quinasa sensor de energía que activa las vías de producción de energía e inhibe los procesos consumidores de energía (por ejemplo, biosíntesis de proteínas, carbohidratos y lípidos) para mantener la homeostasis energética celular.
  Referencias relacionadas:
  PMID:17307971 PMID:17712357 PMID:24563466
• Regula el metabolismo lipídico al promover la lipólisis mediante la fosforilación de CHKA (PubMed:34077757) y al inactivar enzimas biosintéticas de lípidos como ACACA, ACACB y HMGCR (por similitud).
  Referencias relacionadas:
  PMID:34077757
• Fosforila reguladores transcripcionales clave (por ejemplo, CRTC2, FOXO3, HDAC5, MEF2C, MLXIPL, p53) y la histona H2B para modular la expresión génica asociada al metabolismo energético y las respuestas al estrés.
  Referencias relacionadas:
  PMID:11518699 PMID:11554766 PMID:15866171
• Actúa como un regulador negativo crítico del complejo de señalización mTORC1 mediante la fosforilación de RPTOR, TSC2 y WDR24, y promueve la autofagia al activar ULK1 y WDR45 en condiciones de limitación de nutrientes.
  Referencias relacionadas:
  PMID:14651849 PMID:18439900 PMID:20160076 PMID:21205641 PMID:28561066 PMID:36732624 PMID:37079666
• Además, AMPKα1 fosforila a CASP6 para evitar su activación (PubMed:32029622), regula la remodelación del citoesqueleto de actina (PubMed:17486097) y modula la fragmentación mitocondrial y el reclutamiento de ALDH7A1 en condiciones de estrés.
  Referencias relacionadas:
  PMID:32029622 PMID:17486097 PMID:36367943 PMID:31492851 PMID:40233740
• Subcelularmente, AMPKα1 se localiza en el citoplasma, el núcleo y los endosomas tardíos, lo que coincide con sus amplias funciones reguladoras.
• Se caracteriza como serina/treonina-proteína quinasa, fosfoproteína y glicoproteína, y se ha reportado que presenta splicing alternativo.

Guía experimental y consejos técnicos

• El anticuerpo se obtuvo contra un fosfopéptido sintético que abarca los sitios de fosforilación del bucle de activación (Thr183 en AMPKα1 y Thr172 en AMPKα2), por lo que es específico para las formas activas y fosforiladas de AMPKα.
• Para Western blotting, se observan bandas esperadas de aproximadamente 64 kDa (AMPKα1) y 62/65 kDa (AMPKα2); la inclusión de inhibidores de fosfatasas durante la preparación de la muestra es fundamental para preservar la fosforilación.
• Valide la especificidad de detección tratando los lisados con λ-fosfatasa o mediante inhibición competitiva con el péptido no fosforilado en su sistema de muestra correspondiente (por ejemplo, líneas celulares de humano, ratón o rata).
• Las aplicaciones de ELISA pueden requerir la optimización de la concentración del antígeno de recubrimiento y las condiciones de detección, debido a la naturaleza peptídica del inmunógeno.
• Tenga en cuenta que el anticuerpo está validado para WB y ELISA; el rendimiento en otras aplicaciones como IHC, IF o IP debe probarse empíricamente.

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