Fosfo-ATR-S428 pAb de conejo para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q13535

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de ATR

• Funciona como sensor de daño en el ADN, activando la señalización del punto de control en respuesta a radiación ionizante, luz UV o estrés de replicación. Referencias relacionadas: PMID:10597277 PMID:10608806 PMID:10859164
• Fosforila objetivos descendentes en el motivo de consenso [ST]-Q, incluyendo BRCA1, CHEK1, MCM2, RAD17, RBBP8, RPA2, SMC1 y p53/TP53, lo que conduce a la inhibición de la replicación del ADN y la mitosis, y la promoción de la reparación del ADN, la recombinación y la apoptosis. Referencias relacionadas: PMID:11114888 PMID:11418864 PMID:11865061
• Fosforila la histona H2AX en Ser-139 en los focos de daño en el ADN, un evento crítico en la respuesta al daño en el ADN. Referencias relacionadas: PMID:11673449
• Es necesario para la ubiquitinación de FANCD2 y es crítico para el mantenimiento de la estabilidad de los sitios frágiles y la regulación de la duplicación del centrosoma. Referencias relacionadas: PMID:15314022 PMID:12526805
• Regula la transición del ciclo celular S-G2 restringiendo la actividad de CDK1 durante la fase S para evitar la entrada prematura en G2. Referencias relacionadas: PMID:30139873
• Se relocaliza a la envoltura nuclear bajo estrés mecánico y media un punto de control a través de la fosforilación de CHEK1; también promueve la ruptura de la envoltura nuclear y la ruptura de la envoltura micronuclear a través de la fosforilación de LMNA, desencadenando la vía inmune innata cGAS-STING. Referencias relacionadas: PMID:25083873 PMID:37788673 PMID:37832547
• Se localiza predominantemente en el núcleo y el cromosoma, y se expresa ampliamente, con los niveles más altos en los testículos.

Guía experimental y consejos técnicos

• Dado que el inmunógeno es un fosfopéptido alrededor de Ser428, el anticuerpo debe reconocer específicamente ATR fosforilado en este sitio. Valide la especificidad fosforilada tratando las muestras con fosfatasa o compitiendo con el péptido no fosforilado.
• Para la transferencia Western (western blotting), tenga en cuenta el alto peso molecular de ATR (~301 kDa). Use un gel de bajo porcentaje (por ejemplo, 6% o gradiente 4-12%) y una transferencia húmeda prolongada (por ejemplo, durante la noche a 4°C) para asegurar una transferencia eficiente.
• ATR es una proteína de baja abundancia; considere el enriquecimiento por inmunoprecipitación o el uso de un sustrato de detección de alta sensibilidad.
• Para inmunohistoquímica e inmunofluorescencia, incluya pasos apropiados de recuperación de antígenos y valide la tinción con un control negativo (por ejemplo, bloqueo con péptido o secciones tratadas con fosfatasa).
• Siempre incluya inhibidores de fosfatasas en los tampones de lisis para preservar el estado de fosforilación durante la preparación de la muestra.
• Como anticuerpo policlonal de conejo, puede haber variabilidad entre lotes; recomendamos revalidar en su contexto experimental específico.

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