pAb de conejo Phospho-ATR-T1989 para WB, IHC-P, ELISA - Q13535

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de la serina/treonina proteína quinasa ATR

• ATR es una serina/treonina proteína quinasa también conocida como proteína relacionada con ataxia telangiectasia y Rad3 o proteína 1 relacionada con FRAP. Está codificada por el gen ATR (FRP1) y existe en al menos dos isoformas; la isoforma 2 se encuentra en páncreas, placenta e hígado, pero no en corazón, testículo y ovario.
• Actúa como una quinasa sensor de daño del ADN clave, activando la señalización de puntos de control ante estrés genotóxico como radiación ionizante, luz UV o bloqueo de la replicación del ADN (PubMed:10597277, PubMed:10608806, PubMed:10859164). Referencias relacionadas: PMID:10597277 PMID:10608806 PMID:10859164
• Reconoce la secuencia consenso del sustrato [ST]-Q y fosforila objetivos posteriores incluyendo BRCA1, CHEK1, MCM2, RAD17, RBBP8, RPA2, SMC1 y p53/TP53, inhibiendo de esta manera la replicación del ADN y la mitosis, al mismo tiempo que promueve la reparación, la recombinación y la apoptosis (PubMed:11114888, PubMed:11418864, PubMed:11865061). Referencias relacionadas: PMID:11114888 PMID:11418864 PMID:11865061
• Fosforila la 'Ser-139' de la histona H2AX en los sitios de daño del ADN, regulando la respuesta al daño del ADN (PubMed:11673449); también es necesaria para la ubiquitinación de FANCD2. Referencias relacionadas: PMID:11673449
• Regula las transiciones del ciclo celular al restringir la actividad de CDK1 durante la fase S para evitar una entrada prematura en G2, y es fundamental para la estabilidad de los sitios frágiles y la duplicación correcta del centrosoma (PubMed:12526805, PubMed:30139873). Referencias relacionadas: PMID:12526805 PMID:30139873
• Actúa como sensor de estrés mecánico en la envoltura nuclear, donde se re-localiza después del estrés y fosforila CHEK1 para mediar un punto de control (PubMed:25083873). También promueve la rotura de la envoltura nuclear después del daño del ADN al fosforilar LMNA en la 'Ser-282' (PubMed:37832547). Referencias relacionadas: PMID:25083873 PMID:37832547
• Participa en la inmunidad innata: ATR se localiza en los micronúcleos derivados de la inestabilidad del genoma y fosforila LMNA en la 'Ser-395', lo que provoca la rotura de la envoltura micronuclear y la activación de la vía cGAS-STING (PubMed:37788673). Referencias relacionadas: PMID:37788673
• La localización subcelular es predominantemente nuclear y asociada a cromosomas; también se encuentra en la envoltura nuclear. Se expresa de forma ubicua con los niveles más altos en el testículo. Se clasifica en palabras clave que incluyen fosfoproteína, daño del ADN, reparación del ADN, quinasa y splicing alternativo.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es un péptido fosforilado sintético alrededor de T1989, por lo que este anticuerpo debe reconocer específicamente a ATR fosforilada en este sitio. Para la validación, considere usar un péptido no fosforilado o lisados tratados con fosfatasa como controles negativos.
• En Western blot (WB), se espera una banda alrededor de 301 kDa. Debido al alto peso molecular, optimice las condiciones de transferencia (por ejemplo, bajo contenido de metanol, tiempos de transferencia prolongados) y use un control de carga validado de tamaño similar.
• Para inmunohistoquímica (IHC-P) y ELISA, asegure pasos adecuados de recuperación de antígeno y bloqueo; la reactividad cruzada con ratón y rata permite su uso en modelos de roedores, pero confirme con los controles de tejido correspondientes.
• Dado que la fosforilación de ATR es inducida por daño del ADN, el tratamiento de las células con agentes genotóxicos (por ejemplo, UV, hidroxiurea) puede mejorar la detección de la señal.

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