Anticuerpo monoclonal de conejo anti-Fosfo-CDK1-T161+CDK2/CDK3-T160 para WB, IP, IF - P06493

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de CDK1

• La quinasa 1 dependiente de ciclina (CDK1, también conocida como CDC2/p34) es una serina/treonina quinasa altamente conservada que actúa como el regulador maestro del ciclo celular eucariota, impulsando la transición G2-M y coordinando la entrada y progresión mitótica (PubMed:16407259, PubMed:16933150, PubMed:17459720). Referencias relacionadas: PMID:16407259 PMID:16933150 PMID:17459720
• La actividad de CDK1 está estrictamente controlada por la unión a ciclinas y la fosforilación: la activación requiere la fosforilación en T161 por el complejo quinasa activadora de CDK (CAK) (CDK7/ciclina H/MAT1), mientras que la fosforilación inhibitoria en T14 e Y15 está mediada por WEE1 y PKMYT1; la desfosforilación por las fosfatasas CDC25 en el límite G2-M desencadena una activación súbita (PubMed:18480403, PubMed:20360007, PubMed:2188730). Referencias relacionadas: PMID:18480403 PMID:20360007 PMID:2188730
• Una vez activada, CDK1 fosforila más de un centenar de sustratos aguas abajo para orquestar los eventos mitóticos, incluyendo la fosforilación de láminas que conduce a la desintegración de la envoltura nuclear, la fosforilación de proteínas asociadas a microtúbulos para el ensamblaje del huso y la fosforilación de la histona H1 para la condensación cromosómica (PubMed:2188730, PubMed:2344612, PubMed:37788673). Referencias relacionadas: PMID:2188730 PMID:2344612 PMID:37788673
• Subcelularmente, CDK1 se localiza dinámicamente en el núcleo, citoplasma, mitocondrias, centrosomas y huso mitótico, reflejando sus diversos roles funcionales durante la progresión del ciclo celular.
• CDK1 también regula factores de transcripción (p. ej., FOXO1), proteínas apoptóticas (p. ej., Bcl-xL, caspasa 8) y modificadores epigenéticos (p. ej., EZH2), vinculando el control del ciclo celular con decisiones sobre el destino celular y respuestas al daño del ADN (PubMed:18356527, PubMed:19917720, PubMed:20937773, PubMed:20935635). Referencias relacionadas: PMID:18356527 PMID:19917720 PMID:20937773 PMID:20935635
• CDK1 es esencial para el desarrollo embrionario temprano y su desregulación se observa con frecuencia en el cáncer, donde puede estar sobreexpresada o hiperactivada, contribuyendo a una proliferación descontrolada (PubMed:18480403, PubMed:20360007). Referencias relacionadas: PMID:18480403 PMID:20360007
• Además, CDK1 sirve como receptor para la entrada del virus de la hepatitis C (VHC) en los hepatocitos, sugiriendo un papel más allá de la regulación del ciclo celular.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno es un fosfopéptido sintético dirigido contra el T161 fosforilado de CDK1 humano, un residuo conservado en el bucle de activación. Se espera que el anticuerpo reconozca la forma activada (T161-fosforilada) de CDK1 y potencialmente reaccione de forma cruzada con el T160 fosforilado de CDK2 y CDK3 debido a la homología de secuencia.
• Para Western blot, trate los lisados celulares con inhibidores de fosfatasas para preservar el estado de fosforilación. El peso molecular predicho es ~34 kDa; monitoree cambios en la movilidad o intensidad de la banda tras el tratamiento con fosfatasa para confirmar la fosfo-especificidad.
• En inmunoprecipitación, el pre-limpieza con un IgG de control y el uso de condiciones de lisis no desnaturalizantes pueden mejorar la detección de los complejos de CDK1.
• Para inmunofluorescencia e inmunohistoquímica, los métodos de permeabilización y fijación deben optimizarse; el anticuerpo puede detectar patrones de tinción nuclear, citoplasmática y centrosómica dependiendo de la fase del ciclo celular.
• Las aplicaciones de Dot blot y ELISA pueden usarse para el cribado de alto rendimiento de los niveles de fosfo-CDK1 en muestras.

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