mAb de conejo contra Phospho-DRP1-S616 - O00429

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de DRP1

• La proteína similar a dinamina-1 (DNM1L), conocida comúnmente como DRP1, es miembro de la superfamilia de grandes GTPasas de las dinaminas y también se denomina DLP1, DVLP y Dymple.
• DRP1 media la fisión mitocondrial y peroxisomal al oligomerizarse en estructuras tubulares asociadas a la membrana que se envuelven alrededor de los sitios de escisión, contrayendo y cortando las membranas mediante un mecanismo dependiente de la hidrólisis de GTP. Referencias relacionadas: PMID:11514614, PMID:12499366, PMID:17301055, PMID:23530241, PMID:23584531, PMID:33850055
• El reclutamiento a las membranas mitocondriales está impulsado por receptores como MFF, MIEF1 y MIEF2 de manera dependiente de GTP; la hidrólisis posterior de GTP libera a DRP1 y permite que los anillos de filamentos se cierren y corten la doble membrana. Referencias relacionadas: PMID:23283981, PMID:23921378, PMID:29899447
• DRP1 promueve la fisión mitocondrial durante la mitosis y actúa aguas abajo de PINK1 en una vía dependiente de PRKN; su fosforilación rítmica en Ser-637 controla la producción circadiana de ATP. Referencias relacionadas: PMID:19411255, PMID:26992161, PMID:27301544, PMID:29478834, PMID:32484300
• DRP1 es necesaria para el desarrollo normal del cerebro, incluido el cerebelo, y es esencial para la supervivencia neuronal postmitótica al suprimir el daño oxidativo; también facilita la apoptosis del desarrollo durante la formación del tubo neural. Referencias relacionadas: PMID:17460227, PMID:26992161, PMID:27145208
• Se expresa de forma ubicua, con los niveles más altos en músculo esquelético, corazón, riñón y cerebro; múltiples isoformas muestran patrones tejido-específicos, incluida una isoforma 1 específica de cerebro y las isoformas 2 y 3 enriquecidas en testículo y músculo esquelético.
• La localización subcelular incluye la membrana externa mitocondrial, peroxisomas, citosol, aparato de Golgi, hoyos recubiertos de clatrina y membranas de vesículas sinápticas; DRP1 está sujeta a modificaciones postraduccionales extensas, que incluyen fosforilación, acetilación, S-nitrosilación y ubiquitinación.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es un fosfopéptido sintético correspondiente a los residuos alrededor del Ser-616 de la DRP1 humana. Se espera que el anticuerpo reconozca específicamente a DRP1 solo cuando esté fosforilado en este sitio.
• Para transferencia Western, se recomienda usar inhibidores de fosfatasa durante la preparación de muestras para preservar la señal de fosforilación de S616, y validar la banda en el peso molecular predicho de 82 kDa en su sistema experimental.
• En inmunoprecipitación, titulé la cantidad de anticuerpo y use tampones de lisis optimizados para conservar el epítopo fosforilado; confirme la especificidad mediante controles de tratamiento con fosfatasa.
• Para aplicaciones de ELISA, incluidos los ensayos de péptidos competitivos, se debe verificar la reactividad del anticuerpo frente al péptido fosforilado y no fosforilado para garantizar la especificidad por la forma fosforilada.

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