Anticuerpo monoclonal de conejo Phospho-eIF4EBP1 (S65) para WB, ELISA - Q13541

Especificaciones y parámetros principales del producto

Información biológica: Función y localización de eIF4EBP1

• eIF4EBP1 (factor de iniciación de la traducción eucariota 4E proteína de unión 1), también conocido como PHAS-I, funciona como un represor clave de la iniciación de la traducción dependiente de la tapa, al unirse al factor de iniciación eucariota 4E (eIF4E).
• En su estado hipofosforilado, eIF4EBP1 compite con eIF4G (eIF4G1 y eIF4G3) por la unión a eIF4E, evitando así el ensamblaje del complejo eIF4F e inhibiendo la iniciación de la traducción.
• La hiperfosforilación de eIF4EBP1, mediada a menudo por la vía mTORC1, induce su disociación de eIF4E, permitiendo la formación del complejo eIF4F y la activación traduccional.
• eIF4EBP1 integra señales de hormonas, factores de crecimiento y nutrientes a través de las vías de señalización MAP quinasa y mTOR para controlar la síntesis de proteínas y el crecimiento celular.
• Es una fosfoproteína con múltiples sitios de fosforilación, entre ellos Ser65, que modulan su afinidad por eIF4E y su capacidad para regular la traducción.
• Subcelularmente, eIF4EBP1 se localiza tanto en el citoplasma como en el núcleo, lo que concuerda con sus funciones en el control traduccional y posiblemente en el traslado nucleocitoplasmático.
• Además de la fosforilación, la proteína sufre modificaciones postraduccionales por acetilación y conjugación de tipo ubiquitina (Ubl), lo que pone de relieve mecanismos regulatorios complejos.

Guía experimental y consejos técnicos

• Debido a que este anticuerpo se dirige a un sitio de fosforilación específico (Ser65), confirme la especificidad de la detección tratando los lisados celulares con fosfatasa lambda o comparando las señales de tipo silvestre con las de mutantes deficientes en fosforilación.
• Para Western blot, utilice procedimientos estándar pero asegúrese de que los tampones de lisis contengan inhibidores de fosfatasas para preservar los estados de fosforilación. Un agente de bloqueo como BSA puede ayudar a reducir la unión inespecífica típica de los anticuerpos fosfoespecíficos.
• En ELISA, considere recubrir con el péptido inmunógeno como control positivo e incluya un péptido no fosforilado para verificar la especificidad por la forma fosforilada.
• La activación de mTORC1 (por ejemplo, por estimulación con insulina o suero) aumenta la fosforilación de Ser65, mientras que la inhibición (por ejemplo, con rapamicina) la disminuye; incluya los controles estimulatorios o inhibitorios apropiados en sus experimentos.

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