Fosfo-eIF4EBP1-T45 pAb de conejo para Western Blot - Q13541

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de eIF4EBP1

• La proteína de unión al factor 4E de iniciación de la traducción eucariótica 1 (eIF4EBP1, también conocida como PHAS-I) es un represor clave de la iniciación de la traducción dependiente de capucha. Pertenece a la familia de proteínas de unión a eIF4E y compite con eIF4G por la unión a eIF4E, evitando así el ensamblaje del complejo eIF4F.
• La actividad represora de eIF4EBP1 está regulada por su estado de fosforilación: la eIF4EBP1 hipofosforilada se une fuertemente a eIF4E e inhibe la traducción, mientras que la hiperfosforilación (p. ej., en Thr45 y otros sitios) la disocia de eIF4E, permitiendo la formación de eIF4F y la iniciación de la traducción.
• eIF4EBP1 media la regulación de la síntesis de proteínas aguas abajo de diversos estímulos, incluyendo hormonas, factores de crecimiento y nutrientes, a través de las vías de señalización de la quinasa MAP y mTORC1. La fosforilación en Thr45 es un evento crítico temprano en la cascada secuencial de multifosforilación.
• La localización subcelular es predominantemente citoplasmática, pero eIF4EBP1 también puede trasladarse al núcleo, donde puede tener roles regulatorios adicionales.
• Las modificaciones postraduccionales incluyen acetilación, ubiquitinación (formación de enlaces isopeptídicos) y una fosforilación extensa en múltiples residuos. El peso molecular calculado de la proteína sin modificar es de aproximadamente 12,5 kDa, con una migración en SDS-PAGE a menudo observada alrededor de 13–15 kDa dependiendo del estado de fosforilación.
• eIF4EBP1 se expresa ampliamente y desempeña un papel central en el control del crecimiento celular, la proliferación y la supervivencia. La desregulación de su fosforilación está implicada en el cáncer y los trastornos metabólicos.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno utilizado es un péptido fosforilado sintético que abarca Thr45, lo que indica que este anticuerpo está diseñado para reconocer específicamente la forma fosforilada en Thr45 de eIF4EBP1. Es poco probable que exista reactividad cruzada con eIF4EBP1 no fosforilada u otros miembros de la familia, pero debe evaluarse en sistemas modelo relevantes.
• Para la transferencia Western (Western blotting), asegúrese de que los lisados de proteínas se preparen en presencia de inhibidores de fosfatasas para preservar el estado de fosforilación. Se espera una banda a aproximadamente 13–15 kDa para eIF4EBP1 humana; el peso molecular aparente puede cambiar ligeramente dependiendo de los niveles generales de fosforilación.
• Incluya los controles apropiados para validar la especificidad del anticuerpo, como lisados sin tratar frente a lisados tratados con fosfatasa, o lisados de células con actividad mTORC1 modulada (p. ej., privación de suero/estimulación con insulina).
• El rendimiento del anticuerpo en otras aplicaciones (p. ej., IHC, IF, IP) no se ha descrito; se recomienda una prueba preliminar si se utiliza fuera de WB.

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