Fosfo-EPHA2-Y594 pAb de conejo para WB y ELISA - P29317

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de EPHA2

• EPHA2 codifica el receptor tipo-A de efrina 2, una tirosina quinasa receptora que transduce señales al unirse a ligandos de efrina-A unidos a membrana en células adyacentes, iniciando una señalización bidireccional (directa a través del receptor e inversa a través del ligando).
• Regula una variedad de procesos celulares, incluyendo la migración celular, la adhesión mediada por integrinas, la proliferación y la diferenciación, en parte a través de la modulación de la vía de señalización ERK1/ERK2.
• EPHA2 participa en procesos del desarrollo como la angiogénesis, el patrón del romboencéfalo y la morfogénesis ramificada en la glándula mamaria, y contribuye a la organización y transparencia de las células fibrosas del cristalino.
• Más allá de la fisiología normal, EPHA2 actúa como un receptor para el virus de la hepatitis C (VHC) y el citomegalovirus humano (CMV), mediando la entrada viral en las células huésped.
• La proteína se localiza en la membrana celular con enriquecimiento en protrusiones celulares dinámicas, incluyendo membranas de ruffle, lamelipodios y adhesiones focales, consistente con sus roles en adhesión y motilidad celular.
• EPHA2 se expresa altamente en tejidos ricos en epitelio como la piel, el intestino, el pulmón y el ovario, y también se detecta en el cerebro y líneas celulares de glioma.
• Las características estructurales clave incluyen un dominio de unión a efrina extracelular, un dominio transmembrana de un solo paso y un dominio quinasa intracelular con el residuo de tirosina fosforilable Y594.
• EPHA2 se clasifica bajo múltiples palabras clave funcionales: tirosina proteína quinasa, unión a ATP, receptor, glicoproteína, splicing alternativo y angiogénesis, lo que subraya su papel central en la transducción de señales y la enfermedad.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es un fosfopéptido sintético que abarca la Y594, que debería proporcionar una alta especificidad para la forma fosforilada—confirme la especificidad tratando las muestras con λ-fosfatasa antes del western blot.
• Para el western blot, incluya inhibidores de fosfatasas durante la lisis y considere usar controles positivos como células estimuladas con efrina-A1 o líneas celulares de cáncer epitelial conocidas por sobreexpresar EPHA2.
• Debido a la reactividad cruzada reportada con rata, este anticuerpo puede ser adecuado para estudios en modelos de rata; sin embargo, valide la reactividad y la dilución óptima en su sistema de muestra específico.
• En ELISA, use un formato directo o indirecto con antígeno de captura de fosfo-EPHA2; las condiciones del ensayo deben optimizarse empíricamente para la concentración de recubrimiento y la dilución del anticuerpo de detección.
• Tenga en cuenta que el peso molecular predicho de EPHA2 es de aproximadamente 108 kDa—siempre corra marcadores de peso molecular apropiados y verifique el tamaño de la banda.

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