mAb de conejo anti JAK2 fosforilado (Y1007/1008) para WB, ELISA - O60674

Especificaciones y parámetros principales del producto

Contexto biológico: Función y localización de JAK2

• JAK2 es una proteína tirosina quinasa no transmembrana que fosforila receptores de citocinas de tipo I (por ejemplo, GHR, EPOR, MPL) y receptores de tipo II (por ejemplo, receptores de IFN, interleucinas), iniciando cascadas de señalización posteriores. Referencias relacionadas: PMID:15690087 PMID:15899890 PMID:7615558
• Mediata la señalización esencial en la inmunidad innata y adaptativa, y participa en procesos como el crecimiento celular, el desarrollo, la diferenciación y las modificaciones de histonas.
• Tras la unión al ligando, JAK2 fosforila residuos de tirosina específicos en las colas citoplasmáticas de los receptores, creando sitios de unión para las proteínas STAT; posteriormente fosforila los STAT, que dimerizan y se translocan al núcleo para regular la transcripción genética. Referencias relacionadas: PMID:9618263
• En la eritropoyesis, la estimulación con EPO induce la autofosforilación y activación de JAK2, su asociación con EPOR y la posterior fosforilación y activación de STAT5, que promueve la transcripción de genes relacionados con la eritropoyesis. Referencias relacionadas: PMID:9657743
• En el núcleo, JAK2 fosforila la histona H3 en el residuo Tyr-41 (H3Y41ph), una modificación que excluye a HP1α de la cromatina, por lo que desempeña un papel directo en la regulación epigenética. Referencias relacionadas: PMID:19783980
• Su localización subcelular incluye el sistema de endomembranas, el citoplasma y el núcleo, lo que coincide con su doble función de señalización citoplasmática y nuclear.
• Se expresa de forma ubicua en la mayoría de tejidos, lo que refleja su papel generalizado en la señalización por citocinas.
• Sus características estructurales clave incluyen un dominio SH2 y dominios tandem similares a quinasas; está clasificada como tirosina-proteína quinasa, regulador de la cromatina y protooncogén.

Guía experimental y consejos técnicos

• El anticuerpo se obtuvo frente a un péptido sintético fosforilado que abarca los residuos Y1007 y Y1008; se espera que reconozca específicamente a JAK2 solo cuando esté fosforilada en estos sitios del bucle de activación.
• Para WB, se recomienda utilizar cócteles de inhibidores de fosfatasas durante la preparación de muestras y ejecutar controles positivos y negativos apropiados (por ejemplo, células estimuladas frente a células no estimuladas) para confirmar la especificidad por la forma fosforilada.
• El peso molecular predicho de JAK2 es de ~131 kDa; verifique la migración de la banda con marcadores de peso molecular y tenga en cuenta posibles modificaciones postraduccionales.
• El pretratamiento de lisados celulares con fosfatasa lambda puede ser un control útil para determinar la especificidad por la forma fosforilada.
• Para ELISA, siga los protocolos estándar de inmovilización y detección; el emparejamiento con un anticuerpo de JAK2 total puede permitir la normalización de los niveles de fosforilación.

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