pAb de conejo Phospho-MAP2K4-T261 - P45985

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de MAP2K4

• MAP2K4 (también conocido como MEK4, MKK4, SEK1, JNKK1, entre otros alias) es una proteína quinasa de doble especificidad que funciona como componente clave de la cascada de señalización de quinasas activadas por mitógenos (MAP).
• Es una quinasa esencial en la vía de quinasa activada por estrés/quinasa N-terminal de c-Jun (SAP/JNK), que fosforila y activa directamente a las JNK (MAPK8/JNK1, MAPK9/JNK2, MAPK10/JNK3) y también a las p38 MAPK (MAPK11, MAPK12, MAPK13, MAPK14).
• MAP2K4 fosforila de forma preferente el residuo de tirosina dentro del motivo Thr-Pro-Tyr de las JNK, mientras que MAP2K7 se dirige al residuo de treonina; juntos activan sinérgicamente a las JNK en respuesta a diversos estímulos.
• Esta quinasa es necesaria para mantener la homeostasis linfoide periférica y participa en la señalización de muerte mitocondrial, incluida la liberación de citocromo c que conduce a la apoptosis.
• Su localización subcelular incluye tanto el citoplasma como el núcleo, lo que coincide con su papel en la transducción de señales desde la superficie celular hasta el núcleo.
• MAP2K4 se expresa ampliamente en todos los tejidos, observándose una expresión especialmente abundante en el músculo esquelético.
• La proteína sufre varias modificaciones postraduccionales, entre ellas acetilación, metilación y fosforilación, que regulan su actividad, y está sometida a splicing alternativo.

Guía experimental y consejos técnicos

• Al ser un anticuerpo fosfoespecífico obtenido contra un péptido fosforilado sintético alrededor de Thr261, es fundamental incluir inhibidores de fosfatasas en los tampones de lisis para conservar el estado de fosforilación de MAP2K4 endógeno durante la preparación de muestras.
• Valide la especificidad del anticuerpo tratando los lisados celulares con lambda fosfatasa; la desfosforilación exitosa debe eliminar la señal si el anticuerpo reconoce estrictamente la forma fosforilada de T261.
• Para transferencia western, el peso molecular esperado es de aproximadamente 44 kDa; utilice porcentajes de gel y condiciones de transferencia adecuados para este rango de tamaño.
• La reactividad cruzada se predice para humano, ratón y rata basándose en la homología de secuencia de la región del inmunógeno; sin embargo, se recomienda la verificación en la especie correspondiente.
• En aplicaciones de ELISA, considere utilizar este anticuerpo como reactivo de captura o detección, y optimice las condiciones de recubrimiento y detección de forma empírica con péptidos fosforilados o estándares de proteína.

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