Anticuerpo Monoclonal de Conejo Phospho-NF-kB p65/RelA-S536 para WB, ELISA - Q04206

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización del Factor de Transcripción p65

• Identidad de la proteína y formación de complejos: El factor de transcripción p65 (RELA) es una subunidad clave del complejo del factor de transcripción NF-kB. Forma homodímeros o heterodímeros con otras proteínas de la familia NF-kB/Rel; el heterodímero RELA-NFKB1 es el más abundante y actúa como un activador transcripcional.
• Funciones biológicas principales: NF-kB regula una amplia gama de procesos biológicos, incluyendo inflamación, inmunidad, diferenciación celular, proliferación y apoptosis. Es esencial para la expresión de genes de citocinas en células T.
  Referencias relacionadas: PMID:15790681
• Respuesta antiviral: RELA funciona como un factor de transcripción clave en la respuesta al interferón durante la infección por SARS-CoV-2.
  Referencias relacionadas: PMID:33440148
• Localización subcelular y activación: En células no estimuladas, NF-kB se secuestra en el citoplasma por las proteínas inhibidoras I-kB. Tras la estimulación, I-kB es fosforilada por IKK y degradada, liberando a RELA para que se transloque al núcleo y active la transcripción de genes diana.
• Fosforilación en Ser536: La fosforilación de RELA en Ser536 es una modificación postraduccional crítica que mejora su actividad transcripcional, promueve la localización nuclear y puede modular las interacciones con coactivadores.
• Otras modificaciones e interacciones con el huésped: Además de la fosforilación, RELA se modifica por acetilación, metilación, ubiquitinación y S-nitrosilación, y participa en interacciones huésped-virus.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• Este anticuerpo se generó contra un fosfopéptido sintético correspondiente a los residuos que rodean a Ser536 de RELA humana; se espera que reconozca específicamente la forma fosforilada de la proteína.
• Para la transferencia Western (WB), considere estimular las células con activadores conocidos de NF-kB (p. ej., TNF-α, LPS) para inducir la fosforilación en Ser536. Incluya inhibidores de fosfatasas en los tampones de lisis para preservar el epítopo fosforilado.
• Valide la especificidad de la señal fosforilada comparando muestras estimuladas frente a no estimuladas, o tratando los lisados con fosfatasa lambda antes de la WB.
• Para aplicaciones de ELISA, optimice las condiciones del ensayo para la detección de proteínas fosforiladas y considere el uso de un anticuerpo de detección específico para fosfo para garantizar la especificidad.
• Se informa que el anticuerpo presenta reactividad cruzada con RELA de ratón y rata; confirme la reactividad con los lisados apropiados de estas especies.

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