Anticuerpo policlonal de conejo para Phospho-NF-κB p65/RelA (Ser468) para WB, ELISA - Q04206

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de NF-κB p65/RelA

• NF-κB p65 (también conocido como RelA, NFKB3) es una subunidad del complejo del factor de transcripción NF-κB, que pertenece a la familia de proteínas que contienen el dominio de homología Rel, que incluye RELA, RELB, REL, NFKB1/p105 y NFKB2/p52.
• El heterodímero canónico de NF-κB RELA-NFKB1 se une a sitios κB del ADN para activar genes implicados en la inflamación, inmunidad, crecimiento celular, diferenciación y apoptosis.
• p65/RelA forma tanto heterodímeros activadores (por ejemplo, RELA-NFKB1) como homodímeros (RELA-RELA), estos últimos implicados en la expresión de IL-8 mediada por invasina.
• Su localización subcelular es principalmente citoplásmica en estado inactivo, unido a inhibidores IκB; tras la activación, se transloca al núcleo para regular la transcripción.
• p65 está sujeto a extensas modificaciones postraduccionales que incluyen fosforilación, acetilación, metilación, ubiquitinación y S-nitrosilación, que modulan su actividad y estabilidad.
• La fosforilación en Ser468 (y otros residuos) participa en el ajuste fino de la actividad transcripcional y las interacciones proteicas.
• RelA es esencial para la expresión de genes de citoquinas en linfocitos T. Referencias relacionadas: PMID:15790681
• Actúa como un factor de transcripción clave en la respuesta al interferón durante la infección por SARS-CoV-2. Referencias relacionadas: PMID:33440148

Guía experimental y consejos técnicos

• Este anticuerpo se obtiene contra un fosfopéptido sintético alrededor de Ser468; por lo tanto, reconoce específicamente la forma fosforilada de p65/RelA. Para una detección precisa, incluya inhibidores de fosfatasas en los buffers de lisis y lavado.
• Para confirmar la fosfoespecificidad, trate las muestras con proteína fosfatasa lambda y compare las señales de banda por WB; la pérdida de señal indica dependencia de la fosforilación.
• Para WB, realice la SDS-PAGE en condiciones reductoras y utilice controles adecuados (por ejemplo, lisados de células no tratadas frente a estimuladas que se sabe activan NF-κB).
• Para ELISA, el anticuerpo se puede usar como reactivo de captura o detección; valide su emparejamiento con un anticuerpo p65 no fosfoespecífico para ELISA sándwich.
• Tenga en cuenta la reactividad cruzada con muestras de rata como se indica; no obstante, valívelo en su modelo experimental específico.

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