Anticuerpo policlonal de conejo Phospho-p90Rsk/RSK1/RPS6KA1-T359/S363 para WB, ELISA - Q15418

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de RPS6KA1/RSK1

• Identidad proteica: RPS6KA1 codifica la proteína ribosomal S6 quinasa alfa-1 de 90 kDa (RSK1/p90RSK), una serina/treonina quinasa de la familia p90RSK; el empalme alternativo genera múltiples isoformas.
• Efector de la vía ERK-MAPK: Actúa corriente abajo de ERK1/2 para fosforilar los factores de transcripción CREB1, ETV1/ER81, NR4A1/NUR77 y el cofactor CREBBP, promoviendo la expresión de genes de respuesta inmediata y la mitogénesis.
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• Inicio de la traducción: Mejora la traducción dependiente de la capa al fosforilar RPS6 y EIF4B en respuesta a insulina o factores de crecimiento.
  Referencias relacionadas: PMID:16763566 PMID:17360704
• Modulador de la señalización mTOR: Regula la actividad de mTORC1 y mTORC2 mediante la fosforilación de TSC2 y RPTOR, y genera retroalimentación a través de DEPTOR.
  Referencias relacionadas: PMID:15342917 PMID:22017876
• Efectos antiapoptóticos: Inhibe las proteínas proapoptóticas BAD y DAPK1 y promueve la supervivencia de las células estrelladas hepáticas y los hepatocitos mediante la fosforilación de CEBPB.
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• Migración celular: Fosforila EPHA2 en Ser-897 para controlar la motilidad celular.
  Referencias relacionadas: PMID:26158630
• Localización subcelular y regulación: Se traslada entre el núcleo y el citoplasma; su actividad quinasa está controlada por fosforilación en múltiples sitios, incluidos los residuos de activación relevantes Thr359 y Ser363 reconocidos por este anticuerpo.

Guía experimental y consejos técnicos

• Este anticuerpo fosfoespecífico se generó contra un péptido sintético que porta los residuos Thr359 y Ser363 fosforilados. Para transferencia Western, confirme la especificidad preincubando el anticuerpo con el péptido no fosforilado o tratando las muestras con fosfatasa lambda antes del inmunoblot.
• En WB, utilice tampones de bloqueo suaves o sin fosfato (por ejemplo, BSA o leche descremada sin inhibidores de fosfatasa) para preservar el reconocimiento del antígeno. Optimice empíricamente la dilución del anticuerpo primario (generalmente 1:500–1:2000) para su tipo de muestra y sistema de detección.
• Para ELISA, recubra el fosfopéptido o el extracto proteico y titule el anticuerpo para lograr una relación señal-ruido óptima. Considere la posibilidad de utilizar un péptido no fosforilado como control negativo.
• Induzca la fosforilación de RPS6KA1 en líneas celulares humanas tratando con EGF (50 ng/mL) o insulina (100 nM) durante 15 a 30 minutos antes de la lisis, ya que RSK1 se activa fuertemente por la vía ERK.
• Se ha demostrado la reactividad cruzada para muestras humanas; para otras especies, verifique la identidad de secuencia de la región del inmunógeno antes de su uso.

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