Anticuerpo monoclonal de conejo contra PKA RIIα (PRKAR2A)-S99 fosforilado para WB y ELISA - P13861

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de PRKAR2A

• PRKAR2A codifica la subunidad regulatoria de la proteína quinasa tipo II-alfa dependiente de cAMP, un componente clave del holoenzima PKA que modula las respuestas celulares al cAMP.
• Como subunidad regulatoria de PKA, se une al cAMP, lo que lleva a la disociación y activación de las subunidades catalíticas, que luego fosforilan dianas posteriores involucradas en el metabolismo, la expresión génica y la proliferación celular.
• Las subunidades regulatorias de tipo II median la asociación con la membrana al unirse a proteínas de anclaje de quinasa A (AKAP), incluida la quinasa MAP2, localizando así la actividad de PKA a compartimentos subcelulares específicos.
• El genoma humano contiene cuatro tipos de subunidades regulatorias (I-alfa, I-beta, II-alfa y II-beta); PRKAR2A pertenece a la clase tipo II-alfa, y su expresión varía entre los tejidos, siendo constitutiva en algunos e inducible en otros.
• PRKAR2A se localiza predominantemente en el citoplasma y puede asociarse con la membrana celular a través de interacciones con proteínas de anclaje, lo que permite el control espacial de la señalización de cAMP.
• La proteína sufre modificaciones postraduccionales, incluida la fosforilación en múltiples sitios (por ejemplo, Ser99) y la acetilación, que regulan su actividad, estabilidad o interacción con socios.
• El empalme alternativo genera diferentes isoformas, y la proteína se clasifica bajo palabras clave como Fosfoproteína, Acetilación y Unión a cAMP, lo que refleja sus roles regulatorios dinámicos.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es un fosfo-péptido sintético alrededor de Ser99; considere verificar la especificidad de la fosforilación comparando las señales entre muestras tratadas y no tratadas o utilizando un control de bloqueo de péptido no fosforilado.
• Para el Western blot, se espera una banda cerca de 46 kDa; optimice el bloqueo y la dilución del anticuerpo en el sistema de muestra relevante, ya que la expresión endógena puede variar.
• En ELISA, utilice el anticuerpo para detectar PRKAR2A fosforilado en lisados celulares o tisulares; incluya controles positivos y negativos apropiados para confirmar la especificidad del ensayo.
• Se confirma la reactividad cruzada con humanos y ratas; si utiliza muestras de ratón, valide experimentalmente la reactividad cruzada debido a posibles diferencias de secuencia.
• Debido al papel crítico de PKA en la señalización, la fosforilación en Ser99 puede ser dinámica; considere estimular o inhibir las vías de cAMP al diseñar experimentos.

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