Phospho-POLR2A CTD- S2/S5 Conejo pAb - P24928

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de POLR2A

• La subunidad RPB1 de la ARN polimerasa II dirigida por ADN es el componente central catalítico de la ARN polimerasa II (Pol II), responsable de sintetizar precursores de ARNm y muchos ARN no codificantes funcionales. Referencias relacionadas: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:30190596
• El ciclo de transcripción de la Pol II avanza a través de las etapas de iniciación, elongación y terminación, con la enzima formando el centro activo junto con la segunda subunidad más grande POLR2B/RPB2. Referencias relacionadas: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:28108474
• POLR2A añade nucleótidos mediante un mecanismo dependiente de Mg(2+) y posee una actividad exonucleasa correctora de pruebas 3' -> 5' para corregir ribonucleótidos incorporados incorrectamente. Referencias relacionadas: PMID:30190596, PMID:8381534, PMID:9852112
• El dominio C-terminal (CTD) único, que consta de 52 repeticiones de heptapéptidos, sirve como plataforma para la regulación de la transcripción; la fosforilación en Ser5 media el escape del promotor, mientras que la fosforilación de Ser2 es necesaria para la liberación de la pausa y el procesamiento del ARN pre-mensajero. Referencias relacionadas: PMID:24207025, PMID:26124092
• La metilación y acetilación del CTD también regulan la expresión génica: la acetilación está vinculada a la inducción de genes de respuesta temprana inmediata, mientras que la metilación reprime la expresión de genes diana.
• La localización subcelular incluye núcleo, citoplasma y cromosoma, consistente con sus funciones en transcripción y procesamiento de ARN.
• POLR2A también funciona como una ARN polimerasa dependiente de ARN, extendiendo ARN no codificantes y actuando como una replicasa para el virus de la hepatitis delta.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno es un péptido sintético diseñado alrededor de los sitios de fosforilación S2/S5 de la repetición YSPTSPS del CTD de POLR2A, lo que sugiere que el anticuerpo puede reconocer tanto la Ser2 como la Ser5 fosforiladas.
• Para Western blot, debido al alto peso molecular (~217 kDa), considere usar geles de SDS-PAGE de bajo porcentaje (ej. 6-8%) y tiempos de transferencia prolongados; se recomienda incluir inhibidores de fosfatasas en el tampón de lisis para mantener la fosforilación.
• La especificidad se puede evaluar tratando las muestras con fosfatasa lambda o mediante ensayos de competición con péptidos.
• En ELISA, utilice placas recubiertas con péptido fosforilado y confirme la reactividad con controles de péptido no fosforilado para evaluar la fosfo-selectividad.
• Este anticuerpo está indicado para muestras humanas; no se ha informado de reactividad cruzada con otras especies, por lo que se recomienda validación en el sistema de muestra relevante.

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