Anticuerpo Policlonal de Conejo Phospho-POLR2A CTD-T4 para WB, IP, ELISA, ChIP - P24928

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de POLR2A

• POLR2A codifica la subunidad más grande de la ARN polimerasa II (Pol II), una proteína de ~217 kDa que sirve como núcleo catalítico para la síntesis de ARN dependiente de ADN, esencial para la producción de ARNm y ARN no codificante. Referencias relacionadas: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:30190596
• El dominio C-terminal (CTD) de POLR2A consta de 52 repeticiones en tándem del heptapéptido (YSPTSPS) que sufren fosforilación dinámica, principalmente en Ser2 y Ser5, para regular la iniciación, elongación y terminación de la transcripción, así como el procesamiento co-transcripcional del ARN. Referencias relacionadas: PMID:24207025, PMID:26124092
• POLR2A contiene un motivo DxDGD que coordina iones Mg2+ esenciales para la adición de nucleótidos, y también posee una actividad exonucleasa 3'-5' para corrección de pruebas, asegurando una alta fidelidad transcripcional. Referencias relacionadas: PMID:8381534, PMID:9852112
• Localizado principalmente en el núcleo y en los cromosomas, POLR2A también se ha detectado en el citoplasma, lo que refleja su transporte dinámico y sus múltiples funciones.
• Modificaciones postraduccionales que incluyen fosforilación de serina/treonina, acetilación de lisina, metilación y ubiquitinación modulan la actividad y estabilidad de la Pol II.
• El empalme alternativo genera múltiples isoformas, y las mutaciones en POLR2A se asocian con trastornos del neurodesarrollo, lo que destaca su importancia clínica.
• También funciona como una ARN polimerasa dependiente de ARN, extendiendo ARN no codificantes, y actúa como una replicasa para el virus de la hepatitis delta durante la infección.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• Dado que el inmunógeno es un péptido fosfo-específico correspondiente a T4 de las repeticiones CTD de POLR2A, valide la especificidad del anticuerpo utilizando competición con péptido no fosforilado o lisados celulares tratados con fosfatasa para confirmar la dependencia de la fosforilación.
• Para Western Blot (WB), debido al gran tamaño de la proteína (~217 kDa), considere usar geles de SDS-PAGE de bajo porcentaje (por ejemplo, 6-8%) y tiempos de transferencia prolongados para asegurar una transferencia eficiente de POLR2A de longitud completa.
• La aplicación de ChIP puede requerir la optimización de las condiciones de entrecruzamiento y fragmentación de la cromatina; pruebe diferentes métodos de fragmentación (por ejemplo, sonicación o digestión enzimática) para obtener fragmentos de cromatina de 200–500 pb.
• En experimentos de inmunoprecipitación (IP) y ELISA, incluya controles positivos y negativos apropiados, como lisados de líneas celulares que expresen POLR2A conocidas (por ejemplo, HeLa, HEK293) y mutantes fosfo-defectuosos si están disponibles.

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