Anticuerpo Policlonal de Conejo Phospho-PRKCQ-T538 para WB, ELISA - Q04759

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de PRKCQ

• PRKCQ (Proteína quinasa C tipo theta, nPKC-theta) es una serina/treonina proteína quinasa dependiente de fosfolípidos y diacilglicerol e independiente de calcio que desempeña funciones no redundantes en la señalización del receptor de células T (TCR).
• En células T coestimuladas con TCR-CD3/CD28, es necesaria para la activación de NF-kappa-B y JUN, esencial para la producción de IL2, y participa en la transactivación de NFATC1/NFATC2. Referencias relacionadas: PMID:21964608
• Mediaba la activación de la vía canónica de NF-kB fosforilando CARD11, lo que conduce al reclutamiento del complejo BCL10-MALT1 y la activación de IKK.
• PRKCQ es crítica para la diferenciación de células T colaboradoras, siendo necesaria para el desarrollo de células Th2 y Th17, y desempeña un papel menor en la respuesta Th1; también proporciona señales de supervivencia fosforilando BAD y regulando positivamente BCL-XL.
• Más allá de las células T, en las plaquetas regula la transducción de señales río abajo de ITGA2B y otros receptores, desempeñando un papel positivo en la señalización de fuera hacia adentro y la secreción de gránulos.
• Puede mediar los efectos inhibitorios de los ácidos grasos libres sobre la señalización de la insulina fosforilando IRS1, bloqueando así la activación de la vía PI3K/AKT.
• PRKCQ fosforila CCDC88A/GIV e inhibe su actividad de factor de intercambio de nucleótidos de guanina. Referencias relacionadas: PMID:23509302
• También activa LRRK1, que fosforila proteínas RAB involucradas en el tráfico intracelular. Referencias relacionadas: PMID:36040231
• Localización subcelular: Citoplasma y membrana celular.
• Especificidad de tejido: Se expresa en músculo esquelético, células T, células megacarioblásticas y plaquetas.
• Las PALABRAS CLAVE indican que es una fosfoproteína involucrada en la inmunidad y la respuesta inflamatoria, con dominios de dedo de zinc y quinasa.
• La proteína sufre empalme alternativo y tiene modificaciones de unión de isopéptido y conjugación Ubl.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El diseño del inmunógeno se dirige a la fosforilación en Thr538. Para preservar esta modificación lábil, incluya inhibidores de fosfatasas en los tampones de lisis y evite los ciclos de congelación-descongelación de las muestras.
• Para la transferencia Western (western blotting), use un agente de bloqueo suave (p. ej., 5% BSA) para reducir la unión inespecífica; confirme la especificidad del anticuerpo tratando las muestras con fosfatasa lambda antes de la electroforesis.
• Se recomienda la validación en un contexto celular relevante: en líneas celulares T humanas (p. ej., Jurkat) estimuladas mediante anti-CD3/CD28, se debe observar una banda a ~82 kDa, lo que indica la fosforilación de PRKCQ.
• Para la detección basada en ELISA, un fosfopéptido que cubra el sitio T538 puede servir como control positivo; se debe evaluar la reactividad cruzada con el péptido no fosforilado.

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