pAb de conejo Phospho-Raf1-S338 para WB, IHC-P, ELISA - P04049

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de Raf1

• RAF1 codifica la serina/treonina proteína quinasa Raf-1 (también conocida como c-RAF), un transductor crítico de la vía de señalización RAS-RAF-MEK-ERK que gobierna la proliferación celular, la diferenciación, la apoptosis y la transformación oncogénica.
• La activación de Raf1 requiere la fosforilación en Ser338 (y Ser339) por PAK1, lo que desencadena una cascada de quinasas: Raf1 fosforila y activa MEK1/2, que a su vez fosforilan ERK1/2.
• Raf1 fosforilado (p-Ser338) también fosforila directamente a BAD en Ser75, inhibiendo su función proapoptótica y promoviendo la supervivencia celular.
• Raf1 se distribuye en múltiples compartimentos celulares —citoplasma, membrana celular, mitocondrias y núcleo— lo que permite una señalización dependiente del contexto; la Raf1 mitocondrial se une a BCL2 para bloquear la apoptosis.
• En el músculo esquelético, la isoforma 1 de Raf1 es más abundante que la isoforma 2, lo que sugiere una regulación específica de tejido.
• Las mutaciones en RAF1 están vinculadas al síndrome de Noonan y la cardiomiopatía hipertrófica, y el gen es un protooncogén bien establecido que se hiperactiva con frecuencia en cánceres humanos.
• Las modificaciones postraduccionales clave incluyen fosforilación de serina/treonina/tirosina, metilación y ubiquitinación, que ajustan finamente la actividad y estabilidad de Raf1.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es un péptido fosforilado sintético alrededor de Ser338; por lo tanto, el anticuerpo reconoce específicamente a Raf1 solo cuando está fosforilado en este sitio. Para western blot, incluya inhibidores de fosfatasas en los tampones de lisis y considere tratar las muestras con EGF o suero para estimular la fosforilación.
• Para IHC-P, verifique la especificidad fosfo mediante la comparación de la tinción con y sin tratamiento con fosfatasa; las condiciones de recuperación de antígeno pueden requerir optimización para epítopos fosforilados.
• Este anticuerpo está validado para WB, IHC-P y ELISA. Al realizar ELISA cuantitativa, utilice controles adecuados de fosfopéptido y no fosfopéptido para confirmar la especificidad.
• Reacciona de forma cruzada con Raf1 de humano, ratón y rata según los datos del proveedor; valide en el sistema de muestra deseado para garantizar un rendimiento consistente.

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